瘦素對角質形成細胞增殖分化角蛋白的影響及其分子信號通路的研究.pdf

1、銀屑病是臨床上常見的慢性炎癥性皮膚病,由T細胞(Th細胞)協(xié)同角質形成細胞(Keratinocyte,KC)過度增殖性為特征,其發(fā)病機制目前尚未完全闡明,可能是由一系列因素相互作用的多基因遺傳疾病,包括遺傳因素、免疫因素、環(huán)境因素、肥胖等。
　　近來臨床觀察研究發(fā)現(xiàn),銀屑病伴發(fā)肥胖的比例增高,針對肥胖治療后有助于銀屑病好轉,提示肥胖與銀屑病密切相關。瘦素是參與機體代謝的脂肪因子,以往研究表明瘦素與其受體在銀屑病皮損中高表達,瘦素可

2、能與銀屑病的表皮過度增殖相關,提示瘦素可能為銀屑病與肥胖的內(nèi)在重要分子聯(lián)系。
　　在正常皮膚中,KC分化相關性角蛋白K1和K10占主導地位,增殖相關性角蛋白K16和K17幾乎不表達或者少量表達,而在銀屑病皮損中,KC角蛋白譜發(fā)生一定的改變,K16和K17在皮損處高表達,且與PASI呈正相關關系,而 K1和K10則低表達。
　　我們前期研究發(fā)現(xiàn),瘦素在銀屑病患者皮損中過度表達,且瘦素對KC活性及細胞周期、細胞增殖均產(chǎn)生影響,并

3、能刺激KC產(chǎn)生銀屑病相關炎癥因子,包括IL-6、IL-8、TNF-α等,以上研究結果表明瘦素參與了銀屑病表皮過度增殖的病理生理過程,但瘦素在銀屑病病理生理過程中的作用尚不明確。
　　目的：
　　本研究的目的在于通過觀察瘦素對KC角蛋白(K1、K10,K16、K17)表達的影響及其分子調(diào)控為進一步闡明瘦素影響KC增殖在銀屑病發(fā)病機制中奠定基礎。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)HaCaT細胞,用實時熒光定量聚合酶鏈反應(R

4、eal-time PCR)、蛋白質免疫印跡法(Western blot)和細胞免疫熒光染色分別檢測K1、K10、K16、K17 mRNA和蛋白水平的表達,采用Western blot篩選瘦素處理后可能出現(xiàn)的信號通路分子改變,并用相應的通路抑制劑和siRNA處理證實瘦素調(diào)控角蛋白表達的信號通路。
　　結果：
　　1、瘦素對HaCaT細胞增殖分化角蛋白表達的影響:1)mRNA結果:與陰性對照組比較,瘦素組K1、K10 mRNA表

5、達量下調(diào),K16、K17 mRNA均出現(xiàn)不同程度的升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17 mRNA上調(diào)顯著;2)蛋白結果:與陰性對照組相比較,瘦素組K1、K10蛋白表達量降低,K16、K17蛋白均出現(xiàn)不同程度的升高,且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17蛋白顯著增加;3)免疫熒光結果:瘦素組紅色熒光K16、K17表達與陰性對照組相比顯著增加,而K1、K10紅色熒光表達明顯降低,與RT

6、-PCR、Western blot結果相符。
　　2、瘦素調(diào)控HaCaT細胞分子信號通路:用100ng/mL瘦素分別刺激HaCaT細胞5min、10min、20min、40min、80min,發(fā)現(xiàn)瘦素可以激活 JAK-STAT3、ERK1/2分子信號通路。
　　3、分子信號通路抑制劑對瘦素調(diào)控 HaCaT細胞增殖分化角蛋白的影響:1) mRNA結果:與單純使用瘦素組相比較,抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17

7、mRNA顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2)蛋白結果:與單純使用瘦素組相比較,抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17蛋白顯著降低;3)免疫熒光結果:抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組 K1、K10、K16、K17表達的紅色熒光較瘦素組明顯減弱,與RT-PCR、Western blot結果相符。
　　4.、進一步驗證分子信號通路siRNA對瘦素調(diào)控HaCaT細胞增殖角蛋白的影響:1)mRNA結果:siRNA和瘦素聯(lián)合處

8、理組與單純使用瘦素組相比較K16、K17 mRNA顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);2)蛋白結果:siRNA成功阻斷STAT3、ERK1/2分子通路,且K16、K17蛋白明顯低于瘦素組。
　　結論：
　　本研究證明瘦素可以誘導HaCaT細胞高表達K16、K17,低表達K1、K10,其機制可能與STAT3、ERK1/2分子信號通路有關,表明瘦素可影響銀屑病角質形成細胞的增殖,抑制角質形成細胞的分化,提示瘦素可能通過