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1、肝細(xì)胞癌相關(guān)抗原-59(Hepatocellularcarcinoma-associatedantigen59,Hep59),屬于哺乳動(dòng)物中一類含有的大約100個(gè)氨基酸殘基的保守結(jié)構(gòu)域家族,目前發(fā)現(xiàn)的這類蛋白主要存在于真核生物細(xì)胞中,大多為假想蛋白。 從本實(shí)驗(yàn)室家蠶蛹期cDNA文庫(kù)中克隆得到一條全長(zhǎng)為1061bp的基因序列,其NCBI登錄號(hào)為DN985181,其開(kāi)放閱讀框(ORF)為681bp,編碼226個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)分子量
2、為26.1kD,等電點(diǎn)為7.89。將該預(yù)測(cè)的氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)存在一個(gè)和Hep59高度同源的保守結(jié)構(gòu)域,并且N末端不太可能存在信號(hào)肽,具有較強(qiáng)的親水性。 通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因完整ORF框,經(jīng)過(guò)EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切,將該基因重組到帶有His-標(biāo)簽的融合表達(dá)載體pET28at(+)后轉(zhuǎn)化TG1中質(zhì)粒擴(kuò)增,再轉(zhuǎn)化到EcoliRosetta(DE3)菌中表達(dá)分析,SDS-PAGE檢測(cè)在29.9kD處有特異性條帶出
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