二甲雙胍激活A(yù)MPK、調(diào)控細(xì)胞周期抑制裸鼠人食管癌移植瘤生長(zhǎng).pdf

1、背景及目的：
　　二甲雙胍為雙胍類口服降糖藥,是一種廣泛使用的主要針對(duì)2型糖尿病治療的一線藥物。近年來研究顯示,二甲雙胍不僅有降血糖作用,還有抗腫瘤的生物效應(yīng),并能降低腫瘤的發(fā)病率和病死率。其抗腫瘤作用機(jī)制之一是激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activatedproteinkinase,AMPK),并誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯。然而有關(guān)二甲雙胍對(duì)食管癌移植瘤模型是否具有增殖抑制作用及其細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制至今仍未見報(bào)道。我們前期的體外研究已經(jīng)

2、發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞株細(xì)胞周期停滯和增殖抑制,本實(shí)驗(yàn)是在體外研究結(jié)果的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)二甲雙胍對(duì)裸小鼠食管癌移植瘤的增殖抑制作用及分子機(jī)制進(jìn)行研究,為二甲雙胍成為抗腫瘤藥物以及臨床上治療食管癌提供新的理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法：
　　1.用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株EC109細(xì)胞。
　　2.將人食管癌細(xì)胞株EC109細(xì)胞(1×106

3、個(gè)/點(diǎn))接種在8周齡雄裸小鼠皮下,建立裸小鼠食管癌移植瘤動(dòng)物模型,并隨機(jī)分為2組(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組)。2周后予以藥物干預(yù):實(shí)驗(yàn)組用二甲雙胍工作液灌胃(250mg/Kg·d)、對(duì)照組則使用等體積的溶劑生理鹽水,繼續(xù)灌胃5周后處死,測(cè)量移植瘤體積變化,收集瘤體組織進(jìn)行病理解析。
　　3.WesternBlot檢測(cè)經(jīng)二甲雙胍干預(yù)后食管癌移植瘤組織內(nèi)AMPK磷酸化程度,以及細(xì)胞周期調(diào)控因子p53、cyclinD1、p21CIP1及p27KI

4、P1的表達(dá)情況。
　　4.免疫組織化學(xué)染色觀察經(jīng)二甲雙胍干預(yù)的食管癌移植瘤組織p53及p21CIP1的表達(dá)及分布情況。
　　5.觀察灌胃前后裸小鼠的體重、血糖變化。
　　6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和處理:用SPSS17.0軟件,所有數(shù)據(jù)均使用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.二甲雙胍干預(yù)的食管癌移植瘤體積顯著性降低。
　　2.二甲雙胍干預(yù)的食管癌移植瘤組織AMPK磷酸化程度顯著性增強(qiáng)。<