NEDD9在膀胱癌轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、背景:
　　膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其臨床特點(diǎn)是腫瘤多發(fā)和復(fù)發(fā)率高。目前，已在世界范圍的認(rèn)可的治療方法是根治性手術(shù)為主的綜合療法，但并未給患者生存期帶來突破性改善。膀胱癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前引發(fā)膀胱癌死亡的主要原因是演進(jìn)期膀胱癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，認(rèn)為與多基因、多層次的細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)紊亂有關(guān)，而膀胱癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理尚不完全明了。因此，尋找能夠作為膀胱癌早期診斷的新治療靶點(diǎn)的生物分子和標(biāo)記物，明確膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及

2、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制具有重要的意義。
　　NEDD9(Neural precursor cell Expressed Developmentally Down-regulated9)是一種細(xì)胞骨架蛋白，在多種常見惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，并已證實(shí)其是一種與腫瘤發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子，在腫瘤的發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。然而對(duì)NEDD9在膀胱癌中所發(fā)揮作用的研究在國(guó)內(nèi)外鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。NEDD9和膀胱癌的發(fā)生發(fā)展是否有相關(guān)性是本研究

3、需要探討的核心。
　　目的:
　　檢測(cè)膀胱癌組織和正常正常膀胱組織中NEDD9 mRNA及蛋白的表達(dá)，并分析其與膀胱癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。上調(diào)或下調(diào)膀胱癌細(xì)胞株中NEDD9的表達(dá)，觀察NEDD9表達(dá)水平改變對(duì)膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。
　　方法:
　　1. NEDD9在膀胱癌組織及癌旁組織中的表達(dá)差別及意義
　　收集24對(duì)配對(duì)的組織標(biāo)本，采用熒光定量RT-PCR、免疫組化SP法及Westernb

4、lot檢測(cè)各組組織中NEDD9 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量;并統(tǒng)計(jì)分析NEDD9在膀胱癌及癌旁膀胱黏膜組織中的表達(dá)差異，以及NEDD9表達(dá)量與膀胱癌分化程度的相關(guān)性。
　　2. NEDD9對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響
　　采用熒光定量RT-PCR及western blot法分析膀胱癌細(xì)胞株EJ，T24，5637，RT-4中NEDD9本底表達(dá)水平，利用NEDD9過表達(dá)腺病毒及NEDD9 siRNA，上調(diào)或下調(diào)膀胱癌

5、細(xì)胞株中NEDD9的表達(dá)，運(yùn)用MTT法，流式細(xì)胞技術(shù)，單層細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，transwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)，觀察NEDD9表達(dá)水平改變對(duì)膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。
　　結(jié)果:
　　1. NEDD9在膀胱癌組織中及癌旁組織中的表達(dá)差別及意義
　　在收集的24例膀胱癌組織標(biāo)本中，免疫組化結(jié)果顯示與正常膀胱組織相比，高、低分化膀胱癌組織中NEDD9的染色均升高，低分化膀胱癌組織中NEDD9的升高尤為明顯;熒

6、光定量RT-PCR結(jié)果顯示與癌旁組織相比，低分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達(dá)水平顯著升高，而高分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著差異;Western Blot結(jié)果顯示與癌旁組織相比，低分化膀胱癌組織中NEDD9蛋白表達(dá)量也表現(xiàn)為明顯升高。
　　2. NEDD9膀胱癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響
　　熒光定量RT-PCR及western blot檢測(cè)顯示NEDD9在膀胱癌細(xì)胞株EJ，5637，T24

7、，RT-4均有表達(dá)，其中EJ細(xì)胞中表達(dá)水平最低，而5637細(xì)胞中表達(dá)水平最高。
　　敲低5637細(xì)胞中NEDD9后培養(yǎng)84h后，可觀察到其生長(zhǎng)與對(duì)照組相比收到顯著抑制，而流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示5637-NEDD9 siRNA組的凋亡比例比5637-NC組提高近10％，提示敲低NEDD9可抑制5637細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。
　　NEDD9過表達(dá)促進(jìn)EJ細(xì)胞劃痕愈合，可以提高transwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)中的穿膜細(xì)胞數(shù)，反之5

8、637-NEDD9 siRNA組的劃痕愈合能力減弱，且穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量顯著下降。
　　結(jié)論:
　　1. NEDD9蛋白及其mRNA在膀胱癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)量與膀胱癌的分化程度密切相關(guān)。提示NEDD9有望成為膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)指標(biāo)，且可望成為膀胱癌靶向治療的有效靶點(diǎn)。
　　2. NEDD9 siRNA能顯著下調(diào)膀胱癌5637細(xì)胞中NEDD9的表達(dá)，抑制細(xì)胞增值，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞的遷移及侵襲力。NEDD