miR-143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討.pdf

1、中山大學碩士學位論文miR143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討姓名：董文申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導(dǎo)教師：黃健20080508mjR—143在膀胱癌中的表達及其作用機理探討低表達進行進一步的鑒定，并探討膀胱癌中miR一143的低表達在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中可能存在的作用機理及臨床意義，為膀胱癌在基因水平的診治提供理論基礎(chǔ)與實驗依據(jù)。首先，在對miR一143在膀胱癌中的表達的鑒定及臨床意義分析方面，我們對2張miIⅢAs的表達譜芯片進行

2、分析，發(fā)現(xiàn)miR143在正常膀胱上皮組織中高表達而在膀胱移行上皮癌中卻呈現(xiàn)低表達的特點，二者的差異表達高達177倍。為了對這一結(jié)果進行進一步的確認，我們運用Nonhemblotting技術(shù)檢測了9例膀胱癌組織、6例正常膀胱組織及膀胱癌細胞株EJ、T24中miR143的表達情況結(jié)果顯示6例J下常膀胱組織中miR143高表達，而9例膀胱癌組織以及EJ、T24細胞株中miR143不表達或者低表達。在這一結(jié)果基礎(chǔ)上，我們?yōu)榱诉M一步探討miR14

3、3在膀胱癌中低表達與臨床病理的關(guān)系，我們運用realtimePCR技術(shù)對28例不同分期分級的膀胱移行上皮癌組織及2例正常膀胱上皮組織中miR143的表達進行了定量檢測，結(jié)果顯示所有癌組織中miR143都低表達，但很遺憾并沒有發(fā)現(xiàn)其與膀胱癌的分期分級存在顯著的相關(guān)性。其次，在探討膀胱癌中miR143功能學方面，我們將miR143成熟體、陰性對照RNA轉(zhuǎn)染膀胱癌EJ細胞株。轉(zhuǎn)染6h后，熒光顯微鏡下即能觀察到帶綠色熒光的細胞，轉(zhuǎn)染率90％以上

4、。轉(zhuǎn)染48h后，收集細胞的總I斟A及蛋白。進一步通過RealtimePCR技術(shù)驗證了轉(zhuǎn)染的成功，并通過ImPCR，wbstemblot技術(shù)觀察了miR一143的潛在靶基因RAS癌基因編碼蛋白RAS及ml玳A的變化。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR。143成熟體的膀胱癌EJ細胞中RAS蛋白的表達水平明顯降低，HRAS、K—RASmRNA無明顯變化；而對照組中RAS蛋白、H—RAS及KRASmI礬A均無明顯變化。對文獻報道的miR143另一潛在靶基因E

5、RK一5，我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR143成熟體前后膀胱癌EJ細胞中ERK5蛋白變化不明顯。綜上所述，我們運用Nonhemb10ning、realtimePCR技術(shù)證實了miR143在膀胱癌中較正常膀胱上皮中顯著降低，且miR143可能通過作用于潛在靶基因RAS，抑制其蛋白的翻譯并阻止其傳導(dǎo)通路的活化，從而抑制腫瘤形成。這些研究成果不僅為膀胱癌的發(fā)病機理提供了新的研究途徑，而且為臨床上膀胱癌的診斷以及miRNAs作為膀胱癌基因治療的新策略奠定了