交感神經(jīng)突觸前H-,3-受體和α-,2-受體共同調(diào)控組胺釋放的研究.pdf

1、我們實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，合成組胺(HA) 的組氨酸脫羧酶(HDC) 與合成去甲腎上腺素(NE) 的酪氨酸羥化酶和多巴胺-β-羥化酶(DβH) 共存于交感神經(jīng)元內(nèi)，同時HA和NE本身也共存其中；高濃度K+除極可以觸發(fā)心臟突觸體釋放HA。這些結(jié)果提示，HA很可能是一種尚未被認識的交感神經(jīng)遞質(zhì)。然而，要確認HA為一種新的交感神經(jīng)遞質(zhì)，還必須明確HA是否能夠從交感神經(jīng)末梢釋放？其釋放是否符合經(jīng)典遞質(zhì)釋放的規(guī)律？交感神經(jīng)突觸前受體對HA釋放是否具

2、有調(diào)控作用，以及這些受體是否參與共同調(diào)解HA的釋放？為了回答上述未知問題，本研究采用電場刺激離體灌流豚鼠輸精管標本，應(yīng)用熒光分光光度計檢測灌流液中HA和NE等方法，了解組胺的釋放規(guī)律和調(diào)控規(guī)律，為揭示和證明交感神經(jīng)源性組胺的遞質(zhì)特性提供更為有力的證據(jù)。 1 改良的組胺熒光分光光度檢測方法的建立 為了檢測組織液中組胺的釋放含量，針對現(xiàn)有方法存在操作煩瑣，耗時，或者靈敏度不高等不足，我們對已有的熒光分光光度法進行了改良，建立

3、了簡單、快捷、靈敏、穩(wěn)定的檢測HA 的方法。采用鄰苯二甲醛(OPA) 對組織中釋放的組胺進行衍生，對衍生物進行激發(fā)與發(fā)射波長掃描；采用Na3PO4 沉淀組織液中的干擾離子，建立了檢測組胺的熒光分光光度法。結(jié)果表明組胺-鄰苯二甲醛衍生物的最大激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為347 nm和442 nm，Na3PO4 能夠有效的消除Ca2+ 和Mg2+離子對熒光的淬滅作用。本法測定組胺的工作曲線回歸方程為F = 14.276C +40.392，相關(guān)系

4、數(shù)γ =0.9995，線性范圍為1～100 ng/ml，檢出限為0.5 ng/ml。 高、中、低濃度組胺的回收率為91.9％～115.8％。該方法可用于檢測組織中釋放的組胺，無須提取，操作簡便、快捷，效果可靠。 2 不同條件電場刺激對交感神經(jīng)源性組胺釋放的影響 分別向離體豚鼠輸精管標本施以12.5Hz、25Hz 或50Hz 電場刺激，利用熒光分光光度法檢測營養(yǎng)液中組胺和去甲腎上腺素的釋放量的變化。結(jié)果顯示：隨著刺激頻率增

5、強，組胺釋放量也隨之增加，但是組胺釋放量的增加幅度較去甲腎上腺素大。與對照組相比，河豚毒素預(yù)處理后組胺釋放量顯著下降，營養(yǎng)液中組胺的濃度從1.16±0.11 降至0.14±0.08 pmol/ml·mg；應(yīng)用6-羥基多巴胺也可取消電場刺激引發(fā)的組胺釋放，組胺濃度從1.09±0.18 降至0.11±0.05 pmol/ml·mg；而以囊泡單胺轉(zhuǎn)運體2 的抑制劑利血平預(yù)處理后，電場刺激引發(fā)的組胺釋放也減少，由對照組的1.11±0.13 降至

6、處理組的0.27±0.12 pmol/ml·mg。提示本實驗所檢測到的組胺是交感神經(jīng)源性，且相對去甲腎上腺素而言，組胺的釋放對于高頻刺激更為敏感，其釋放動力學過程與去甲腎上腺素可能存在差異。 3 突觸前α2受體以及HA H3受體對HA釋放的共同調(diào)控作用 應(yīng)用腎上腺素α2受體選擇性激動劑brimonidine 可濃度依賴性地抑制電場刺激離體豚鼠輸精管所引發(fā)的組胺和去甲腎上腺素的釋放。而α2受體選擇性拮抗劑育亨賓可取消bri

7、monidine 對組胺釋放的抑制作用。與對照組相比，單獨應(yīng)用育亨賓可使組胺釋放增加。結(jié)果提示，交感神經(jīng)末梢突觸前α2受體對組胺釋放有抑制性調(diào)控作用。組胺H3 受體選擇性激動劑R-(α)-methyhishistamine (αMeHA) 對組胺釋放也有抑制作用，該效應(yīng)可被H3受體拮抗劑thioperamide 所取消，表明H3受體對組胺釋放也具有負反饋調(diào)控作用。 當運用thioperamide 阻斷突觸前H3受體時，brimo

8、nidine 對交感神經(jīng)末梢組胺釋放的抑制作用增強，抑制程度由35±3％ 增加至61±7％ (n=5)。而當突觸前H3受體為αMeHA 所激動時，brimonidine 對交感神經(jīng)末梢組胺釋放的抑制作用消失。 結(jié)果提示，α2 受體對組胺釋放的抑制性調(diào)控作用與交感神經(jīng)突觸前H3 受體的激活狀態(tài)有關(guān)。 結(jié)論：(1) HA能夠從交感神經(jīng)末梢釋放，其釋放動力學過程與去甲腎上腺素可能存在差異；(2) 交感神經(jīng)源性組胺的釋放受交感神