質(zhì)子泵抑制劑與抗生素的聯(lián)合抗菌作用及hefA基因表達(dá)與幽門(mén)螺桿菌多重耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、目的:了解抗生素和質(zhì)子泵抑制劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori,Hp）的聯(lián)合抗菌效應(yīng)；了解外膜蛋白編碼基因 hefA（outer-membrane protein hefA gene）表達(dá)與貴陽(yáng)市Hp多重耐藥的關(guān)系。
　　方法1、采用界值法檢測(cè)Hp臨床菌株對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的敏感性，選取Hp克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林敏感菌株（n=5）和耐藥菌株（n=5），采用棋盤(pán)格法檢測(cè)三種抗生素分別

2、與兩種質(zhì)子泵抑制劑（奧美拉唑、雷貝拉唑）聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Hp的最低抑菌濃度（MIC），通過(guò)公式計(jì)算FIC指數(shù)（Fractional inhibitory concentration Index，F(xiàn)ICI），判斷藥物聯(lián)合抗菌效應(yīng)；比較奧美拉唑和雷貝拉唑分別與三種抗生素聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的FICI，采用兩小樣本t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　2、提取耐三種抗生素的多重耐藥菌株（n=10）、敏感菌株（n=6）及質(zhì)控菌株 SS1的基因組DNA，PCR

3、擴(kuò)增hefA基因片段，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并測(cè)序，將測(cè)序的基因序列輸入NCBI中進(jìn)行BLAST比對(duì)；利用TRIzol試劑提取上述細(xì)菌的RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以16sRNA為內(nèi)參基因，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real time PCR）檢測(cè)hefA基因和內(nèi)參基因的CT值，通過(guò)比較2-ΔΔCt判斷多重耐藥菌株和敏感菌株 hefA基因表達(dá)的差異，以兩小樣本 t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果:1、本實(shí)驗(yàn)分離的69株Hp

4、菌株中同時(shí)對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林耐藥的多重耐藥株為15株，多重耐藥率達(dá)到21.7％（15/69）。
　　2、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林分別與奧美拉唑、雷貝拉唑配伍對(duì)敏感菌株和耐藥菌株的聯(lián)合抗菌作用FICI均小于0.75；雷貝拉唑和左氧氟沙星對(duì)敏感菌株的聯(lián)合抗菌試驗(yàn) FICI比奧美拉唑和左氧氟沙星的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的FICI?。≒=0.035＜0.05，兩小樣本t檢驗(yàn)），奧美拉唑和雷貝拉唑分別與克拉霉素或阿莫西林聯(lián)合抗菌試

5、驗(yàn)的FICI沒(méi)有顯著的差異（P=0.545和0.156＞0.05，兩小樣本t檢驗(yàn)）；雷貝拉唑和阿莫西林對(duì)耐藥菌株的聯(lián)合抗菌試驗(yàn) FICI比奧美拉唑和阿莫西林的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的FICI?。≒=0.012＜0.05，兩小樣本t檢驗(yàn)），雷貝拉唑和奧美拉唑分別與左氧氟沙星或克拉霉素聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的FICI沒(méi)有顯著差異（P=0.789和0.461＞0.05，兩小樣本t檢驗(yàn)）。
　　3、hefA基因的PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳顯示，6株敏感菌和1

6、0株多重耐藥菌及質(zhì)控SS1菌均有約140bp的擴(kuò)增產(chǎn)物，測(cè)序結(jié)果顯示均為幽門(mén)螺桿菌的hefA基因；通過(guò)Real-time PCR在敏感株和多重耐藥株中均檢測(cè)出hefA外排基因的表達(dá)，在敏感株中2-ΔΔCt為0.895±0.540，多重耐藥株中2-ΔΔCt為3.387±1.597，多重耐藥株表達(dá)量顯著高于敏感株（P=0.001＜0.05,兩小樣本t檢驗(yàn)）。
　　結(jié)論:
　　1、奧美拉唑或雷貝拉唑分別與克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫