上消化道壁全層結(jié)扎術(shù)后的愈合觀察.pdf

1、內(nèi)鏡下全層結(jié)扎上消化道壁技術(shù)，主要用于直徑小于12mm上消化道固有肌層腫瘤的治療。多為平滑肌瘤和間質(zhì)瘤，是消化系統(tǒng)常見的病變。消化道固有肌層腫瘤的治療，大體包括：外科開腹手術(shù)切除、腹腔鏡介入下切除及內(nèi)鏡下結(jié)扎治療，幾種方法各有優(yōu)勢。對于較小腫瘤(直徑≤12mm)，內(nèi)鏡下結(jié)扎方法較佳，其創(chuàng)傷小、恢復(fù)快，費用低。目前消化道固有肌層腫瘤的內(nèi)鏡下結(jié)扎治療已在臨床上應(yīng)用數(shù)年，并取得了較好效果，已有較多文獻進行報導(dǎo)。但在固有肌層腫瘤結(jié)扎后的結(jié)扎瘤觀

2、察大都是定期胃鏡下胃內(nèi)觀察，觀察結(jié)扎瘤的脫落和黏膜層的愈合情況，而沒有結(jié)扎處消化道壁愈合的微觀觀察結(jié)果。本試驗是從病理學(xué)角度微觀的觀察消化道壁全層結(jié)扎后，結(jié)扎處愈合過程。即結(jié)扎瘤脫落時和脫落后結(jié)扎處的愈合狀態(tài)對比，觀察結(jié)扎瘤脫落時間和漿膜粘連時間，評估結(jié)扎的風(fēng)險、探討結(jié)扎治療術(shù)的安全性和可靠性。 實驗材料： 1、實驗動物 普通實驗狗、體重大約15-20kg，由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動物實驗室提供。 2、

3、主要試劑 maiyers蘇木素；75％、80％、85％、90％、95％、100％酒精；二甲苯；1％曙紅(伊紅、廣州齊云生物制品公司)；1％鹽酸酒精；PBS(枸櫞酸緩沖液)；苦味酸復(fù)紅；3％雙氧水；一抗(武漢博士德公司)；二抗(Sigma公司)； 3、實驗設(shè)備 普通胃鏡：Pentax EG2940；結(jié)扎器：空氣驅(qū)動式結(jié)扎器(單環(huán)釋放器)；負壓吸引器；病理鉗、異物鉗、注射器等； 4、化驗設(shè)備 顯微鏡

4、OLYMPUSBX41型；切片機SHANDON finess；全自動脫水機SHANDON thermo Electron型；石蠟包埋機LeicaEG1150H；冰箱；溫箱；恒溫攤片烤片機TK-218VIH；石蠟切片用冷臺ZH-3H；電熱鼓風(fēng)干燥箱HN101-2AD； 實驗方法： (1)將4只實驗狗隨機編號為：A、B、C、D。將實驗狗行內(nèi)鏡下上消化道壁全層結(jié)扎術(shù)。每條實驗狗每日結(jié)扎1次，次日結(jié)扎時同時觀察前1次結(jié)扎瘤變化情

5、況，第3次結(jié)扎時同時觀察前2次結(jié)扎瘤變化情況，以此類推。直至首次結(jié)扎瘤脫落，并延續(xù)至首次結(jié)扎后1周時結(jié)扎結(jié)束。麻醉下處死實驗狗，取實驗狗的胃結(jié)扎處消化道壁全層置于10％福爾馬林溶液中，標記結(jié)扎后的時間。 (2)選擇結(jié)扎部位取材，石蠟包埋并切片。分別行HE染色；Van Gieson(膠原纖維)染色法；免疫組化染色：SP法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法)。 (3)電子顯微鏡下觀察切片，統(tǒng)計膠原蛋白含量及毛細血管數(shù)量，

6、使用計算機Bandscan灰度分析軟件分析部分實驗結(jié)果，形成定量比較。 實驗結(jié)果： (1)內(nèi)鏡下觀察結(jié)扎后不同時間結(jié)果：上消化道壁全層結(jié)扎術(shù)后，結(jié)扎瘤脫落時間平均為3-4天。脫落后，黏膜面觀察為1處較深潰瘍，1周后，潰瘍愈合為紅色瘢痕。 (2)結(jié)扎處取材切片染色后觀察結(jié)果：上消化道壁全層結(jié)扎術(shù)后，結(jié)扎部位膠原蛋白含量及毛細血管數(shù)量，1-3天內(nèi)顯著升高，至第3-4達高峰，5-7天出現(xiàn)持續(xù)狀態(tài)。即結(jié)扎處兩側(cè)漿膜層間3