2013年刑臺(tái)地區(qū)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的耐藥性及其耐藥基因的研究.pdf

1、目的:
　　1.分析邢臺(tái)地區(qū)產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrumβ-Lactamases，E-SBLs)肺炎克雷伯菌的耐藥性和流行情況，指導(dǎo)臨床進(jìn)行合理用藥。
　　2.采用PCR技術(shù)對(duì)產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌進(jìn)行基因擴(kuò)增確定其基因型別，掌握邢臺(tái)地區(qū)產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌分子流行病學(xué)特點(diǎn)。
　　方法:
　　1.菌株來源
　　收集邢臺(tái)地區(qū)邢臺(tái)市人民醫(yī)院2013年1月至2013年12月從不

2、同患者血液、尿液、痰液、分泌物、引流液和體腔液等分離出的不重復(fù)的肺炎克雷伯菌菌株。用BD PhoenixTM100全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏分析儀進(jìn)行菌株鑒定。
　　2.藥敏試驗(yàn)
　　用BD PhoenixTM100全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏分析儀進(jìn)行肺炎克雷伯菌藥敏試驗(yàn)。補(bǔ)充藥敏試驗(yàn)采用K-B紙片法。按照CLSI M100-S20文件(2010版)標(biāo)準(zhǔn)判定藥敏結(jié)果。
　　3.ESBLs的表型確證試驗(yàn)
　　采用CLSI

3、M100-S20文件（2010版）推薦的ESBLs的表型確證試，收集到93株產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌。
　　4.耐藥基因的檢測
　　選取16種與產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌的相關(guān)耐藥基因，采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)方法對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，最后置于紫外凝膠成像系統(tǒng)中觀察照相，出現(xiàn)與目的基因分子大小相當(dāng)?shù)臈l帶即可判定為陽性。
　　5.DNA測序分析

4、r>　　對(duì)于耐藥基因陽性率比較高的組(CTX-M-1，CTX-M-9，TEM，SHV和IMP)隨機(jī)選取4株進(jìn)行DNA測序，并將測得的DNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，確定其基因亞型以及有無核苷酸序列的改變。
　　結(jié)果:
　　1.ESBLs的檢出率
　　邢臺(tái)市人民醫(yī)院2013年1月至2013年12月，分離出肺炎克雷伯菌177株，其中產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌93株，檢出率為52.5％。
　　2.標(biāo)本來源的類

5、型構(gòu)成
　　在篩選出的93株產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌中，其中分離自痰、膿液、分泌物、尿液、全血和腦脊液的菌株數(shù)分別為69、11、6、3、3、1，它們所占的比例分別為74.2％、11.8％、6.5％、3.2％、3.2％、1.1％。
　　3.產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌的臨床分布
　　在臨床分離的93株產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌中，來自新生兒科的29株(31.2％)，神經(jīng)外科的14株(15.1％)，ICU的6株(6.5％)

6、和普外科6株(6.5％)。以上科室分離菌株55株，占總株數(shù)的59.1％。
　　4.產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果
　　在25種臨床常用的抗菌藥物中，(1)頭孢唑林、頭孢噻肟、頭孢曲松、氨芐西林和哌拉西林的耐藥率均為100％，頭孢他啶、頭孢吡肟和氨曲南的耐藥率分別為78.3％、90.6％、93.5％。(2)美羅培南和亞胺培南已經(jīng)出現(xiàn)耐藥菌株，耐藥率分別為4.3％和7.5％。(3)含有β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合抗菌藥物中，

7、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率最低，為37.0％，替卡西林/克拉維酸的耐藥率最高，為74.3％。(4)非β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物中，阿米卡星的耐藥率最低為14.5％。
　　5.耐藥基因檢測結(jié)果
　　(1)93株產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌中，耐藥基因TEM，SHV, CTX-M-1，CTX-M-9，IMP, CTX-M-25，OXA-1，OXA-10，PER，GES的檢出率分別為77.4％,86.0％,46.2％,61.3％,19.4

8、％,2.2％,16.1％,2.2％,1.1％,1.1％;CTX-M-2，CTX-M-8，OXA-2，VEB，VIM和KPC等6種耐藥基因沒有檢出。(2)所有菌株均攜帶2種或2種以上的耐藥基因。其中22株(23.6％)攜帶2種耐藥基因，41株(44.1％)攜帶3種耐藥基因，26株(28.0％)攜帶4種耐藥基因，4株(4.3％)攜帶5種耐藥基因。
　　6.基因測序結(jié)果
　　隨機(jī)選取的CTX-M-1，CTX-M-9，TEM，SHV

9、, IMP五組耐藥基因的核苷酸序列，經(jīng)與GeneBank的ESBLs的基因序列對(duì)比發(fā)現(xiàn)，同源性為100％，沒有發(fā)生基因突變。
　　結(jié)論:
　　1.邢臺(tái)地區(qū)產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌檢出率為52.5％，存在多重耐藥現(xiàn)象。菌株來源以痰標(biāo)本為主，從新生兒科分離的菌株最多。
　　2.檢出的產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的耐藥基因主要為CTX-M，SHV和TEM型，所有菌株均攜帶2種或2種以上的耐藥基因。
　　3.邢臺(tái)地區(qū)分離的