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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外缺氧環(huán)境下對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管形成能力的影響并探討其可能機(jī)制,為干細(xì)胞更好的應(yīng)用于臨床上缺血缺氧性疾病的治療提供理論依據(jù)。
方法:
收集成人骨髓血,密度梯度離心法收集分離BMSCs并進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng),傳至第4代用于實(shí)驗(yàn);流式細(xì)胞技術(shù)鑒定BMSCs表面標(biāo)志物。
收集BMSCs常氧環(huán)境(氧濃度為21%)下培養(yǎng)24h和缺氧環(huán)境下(含1%O2,
2、5%CO2和94%N2的混合氣體環(huán)境)培養(yǎng)24h后的細(xì)胞上清液即條件培養(yǎng)基。HUVECs傳代培養(yǎng)后分成3組進(jìn)行實(shí)驗(yàn):對(duì)照組、BMSCsCMN-HUVECs組和BMSCsCMH-HUVECs組,各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞于缺氧環(huán)境下用含不同條件培養(yǎng)基的培養(yǎng)液培養(yǎng),體外血管形成實(shí)驗(yàn)分析3組HUVECs在Matrigel上管腔樣結(jié)構(gòu)形成情況,并進(jìn)行量化比較;MTT檢N3組HUVECs增殖能力。
BMSCs在缺氧環(huán)境下培養(yǎng)0h、12h、24h和
3、48h后,RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SDF-1和VEGF的基因表達(dá)情況,0h為對(duì)照組,12h、24h和48h為實(shí)驗(yàn)組;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中SDF-1和VEGF的蛋白含量。
結(jié)果:
1.人BMSCs傳至第4代呈旋渦狀長(zhǎng)梭形即纖維母細(xì)胞樣生長(zhǎng);對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVECs多為多角形或短梭形,呈”鋪路石”樣排列生長(zhǎng)
2.人BMSCs陽(yáng)性表達(dá)CD29、CD44和CD90,而陰性表達(dá)CD34、CD45和C
4、D106
3.BMSCsCMH-HUVECs組管腔樣結(jié)構(gòu)多于對(duì)照組和BMSCsCMN-HUVECs組。[14±2.3與3±0.59;14±2.3與5±1.1,P<0.05]
4.不同缺氧時(shí)間點(diǎn)(12h,24h和48h)BMSCsCMH-HUVECs細(xì)胞增殖能力均顯著高于對(duì)照組和BMSCsCMN-HUVECs組。[0.54±0.053與0.33±0.041,0.68±0.091與0.42±0.048,0.72±
5、0.106與0.49±0.074;0.54±0.053與0.31±0.041,0.68±0.091與0.43±0.071,0.72+0.106與0.51±0.086,P<0.05]
5.不同缺氧時(shí)間點(diǎn)(12h,24h和48h)BMSCs的SDF-1和VEGF基因表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組。[VEGF:0.718±0.048 vs0.532±0.081,0.922±0.104 vs0.532±0.081,0.843±0.092
6、 vs0.532±0.081;SDF-1:0.569±0.091 vs0.361±0.035,0.701±0.046 vs0.361±0.035,0.695±0.074 vs0.361±0.035,P<0.05]
6.BMSCsCMH中SDF-1和VEGF蛋白含量均明顯高于BMSCsCMN。[SDF-1:(4.52±0.44)ng/106cells與(1.37±0.09)ng/106cells;VEGF:(7.94±0.8
7、9)ng/106cell與(2.75±0.23)ng/106 cells,P<0.05]。
結(jié)論:
1.缺氧環(huán)境下收集的條件培養(yǎng)基即BMSCsCMH顯著提高HUVECs增殖和在Matrigel上管腔樣結(jié)構(gòu)形成能力;
2.缺氧顯著上調(diào)BMSCs的SDF-1和VEGF基因表達(dá),并促進(jìn)二者大量分泌至細(xì)胞上清液中發(fā)揮作用;
3.成人BMSCs在缺氧環(huán)境下通過(guò)旁分泌SDF-1和VEGF提高血
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