溫?zé)嵴T導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤C-,6-細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、山東醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文溫?zé)嵴T導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤C細(xì)胞凋亡的研究姓名：鄧新申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)外科指導(dǎo)教師：李新鋼20000501稿料與麥法1、主要試劑與儀器12oo—Ex透射電子顯微鏡(日本電子公司)，F(xiàn)hCScan型流式細(xì)胞儀(美國BD公司)，sw_c卜IF超凈工作臺，DYY—IIl2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一儀器廠)，1640培養(yǎng)液(美國ttyclone公司)，瓊脂糖凝膠(杭州四季青公司)，蛋白酶K(德國Merck公司)，九DNA／

2、HindⅢ(美國lIyclone公司)。2、細(xì)胞培養(yǎng)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6細(xì)胞系為上海腫瘤研究所提供。用含1096胎牛血清，15mlRPMl640培養(yǎng)液在37℃，5％c02條件下置50ml玻璃培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。該細(xì)胞貼壁生長。隔日換液一次，約5天左右可以消化、傳代一次。消化前可以換液一次，以便除去死亡及漂浮起來的細(xì)胞。利用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，每瓶、每次可利用細(xì)胞約107個。3、溫?zé)嵴T導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡細(xì)胞培養(yǎng)72小時，換液后，第二天，倒掉培養(yǎng)液加入胰

3、酶1—2ml消化細(xì)胞約3分鐘。倒掉胰酶，加入培養(yǎng)液2ml，用滴管吹打貼壁細(xì)胞，待細(xì)胞脫離瓶壁后，移出。置15ml離心管中。用PBS沖洗2次，置水浴恒溫箱中不同溫度(41℃、43℃、45℃)，不同恢復(fù)時間(o、2、6、12、24h)，不同加熱時間(2o分鐘、30分鐘、40分鐘)，條件下處理，例如：做電泳時，41℃，加熱30分鐘后，立即將細(xì)胞離心；去掉上清液，加入蛋白酶K及消化緩沖液。此為41℃加熱30分鐘恢復(fù)時間叫、時。加熱后置孵箱中2小