中毒性休克毒素-1在金黃色葡萄球菌扁桃體炎患兒中的免疫學(xué)研究.pdf

1、目的：中毒性休克毒素-1（TSST-1）在金黃色葡萄球菌致病中起重要作用。本研究構(gòu)建金黃色葡萄球菌pGEX-4T-1/TSST-1重組質(zhì)粒，表達(dá)、純化重組TSST-1；檢測金黃色葡萄球菌所致扁桃體炎患兒臨床分離株TSST-1基因攜帶率及患兒的血清TSST-1特異性抗體水平。檢測TSST-1刺激金黃色葡萄球菌所致扁桃體炎患兒外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）IFN-γ和IL-6的表達(dá)，并探討血清TSST-1特異性抗體水平與IFN-γ、IL-6

2、表達(dá)水平的關(guān)系。
　　方法：根據(jù)GeneBank公布的TSST-1基因序列設(shè)計特異性引物，對TSST-1基因PCR擴(kuò)增及克隆，構(gòu)建pGEX-4T-1/TSST-1重組表達(dá)質(zhì)粒。用GST融合蛋白純化柱純化GST-TSST-1融合蛋白，使用凝血酶切除融合蛋白的GST標(biāo)簽得到純化的重組TSST-1蛋白。采用PCR檢測扁桃體炎患兒扁桃體中分離金黃色葡萄球菌TSST-1基因。使用重組TSST-1蛋白包被酶標(biāo)板，ELISA檢測金黃色葡萄球菌所

3、致扁桃體炎患兒和健康兒童的血清TSST-1特異性抗體（IgG、IgG1和IgG2）水平。 TSST-1刺激金黃色葡萄球菌所致扁桃體炎患兒PBMCs，ELISA法檢測PBMCs上清中的IFN-γ和IL-6細(xì)胞因子水平。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了pGEX-4T-1/TSST-1高效表達(dá)載體，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得分子量約52 kDa（26 kDa GST+26.45 kDa TSST-1）的融合蛋白，純化及凝血酶切后得到高純度的重組TSST-

4、1蛋白，分子量約為26.45 kDa。40株金黃色葡萄球菌的TSST-1基因檢出率為67.5％。金黃色葡萄球菌感染扁桃體炎患兒血清TSST-1特異性抗體IgG、IgG1、IgG2水平分別為（0.447±0.302）、（0.295±0.074）、（0.194±0.087）；健康兒童組血清TSST-1特異性抗體IgG、IgG1、IgG2水平分別為（0.183±0.069）、（0.175±0.074）、（0.164±0.077）。金黃色葡萄球

5、菌扁桃體炎患兒和健康兒童在血清TSST-1特異性IgG、IgG1抗體水平存在顯著差異。以健康兒童血清TSST-1特異性IgG為陰性對照建立ROC曲線，得到TSST-1特異性IgG的CUTOFF值為0.288。金黃色葡萄球菌扁桃體炎患兒血清TSST-1特異性IgG的陽性率為70%。患兒PBMCs受到TSST-1刺激時培養(yǎng)上清IFN-γ和IL-6的水平均比健康兒童的高，IFN-γ在兩者之間存在顯著差異?；純貉錞SST-1特異性IgG陰性組

6、IFN-γ和IL-6的表達(dá)含量均高于TSST-1特異性IgG陽性組和健康組，而TSST-1特異性IgG陽性組IFN-γ和IL-6的含量均低于TSST-1特異性IgG陰性組和健康組?；純貉錞SST-1特異性IgG與PBMCs培養(yǎng)上清IFN-γ和IL-6水平呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：獲得重組TSST-1的高效表達(dá)，純化的重組TSST-1具有免疫學(xué)活性。TSST-1刺激患兒PBMCs中細(xì)胞因子IFN-γ顯著升高，誘導(dǎo)患兒Th1優(yōu)勢免疫。T