血漿型PAF-AH基因多態(tài)性與腦梗死及腦動脈粥樣硬化性狹窄的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、背景：腦卒中包括出血性腦卒中和缺血性腦卒中，是目前世界范圍內(nèi)導(dǎo)致人類死亡的主要疾病之一，存活者致殘率高達(dá)到75％。我國人群腦卒中發(fā)病率、死亡率的流行病學(xué)研究結(jié)果顯示，腦卒中已經(jīng)成為中國人群的主要死亡原因，占城市人口死亡比例的20%，占農(nóng)村人口死亡比例稍低（19%）；平均年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為116/10萬，死亡率為81/10萬。腦卒中的高發(fā)病率、高致死率和高致殘率，給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。腦梗死(crebral infraction，C

2、I)約占所有腦卒中的80%，是指各種原因所致的腦部血液供應(yīng)障礙，導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧壞死，出現(xiàn)相應(yīng)神經(jīng)功能缺損。參照目前國際公認(rèn)的、1993年美國 Adams提出的TOAST（the Trial of Org10172 in Acute Stroke Treatment）病因分型法，腦梗死分為包括大動脈粥樣硬化型（large-artery atherosclerotic related，LAA）、心源性栓塞型（cardioembolis

3、m，CE）、小動脈閉塞型（small-artery occlusion lacunar，SAOL）、其他明確病因型（acute stroke of other determined etiology，SDE）和不明原因型（stroke of other undetermined etiology，SUE）在內(nèi)的5型。根據(jù)TOAST病因分型標(biāo)準(zhǔn)，大動脈粥樣硬化型腦梗死（large-artery atherosclerotic relate

4、d cerebral infraction，LAACI）病人應(yīng)具備腦的主干動脈或皮層分支動脈狹窄＞50%或閉塞，其原因可能是由于腦動脈粥樣硬化引起。
　　腦大動脈粥樣硬化性狹窄（cerebral artery large-artery atherosclerotic related stenosis， CAAS）是腦梗死重要的病因。隨著近年來腦神經(jīng)和血管影像技術(shù)的發(fā)展，對大動脈粥樣硬化型腦梗死、腦大動脈粥樣硬化性狹窄的干預(yù)愈來愈受

5、重視。綜合運(yùn)用藥物、介入或外科手段對大動脈粥樣硬化型腦梗死、腦大動脈粥樣硬化性狹窄進(jìn)行預(yù)防、治療，早期積極干預(yù)腦大動脈粥樣硬化性狹窄形成的危險因素及狹窄顱內(nèi)外分布的影響因素，對防治大動脈粥樣硬化型腦梗死及腦大動脈粥樣硬化性狹窄有重要意義。
　　腦大動脈粥樣硬化性狹窄的形成及狹窄的顱內(nèi)外分布受到傳統(tǒng)危險因素和遺傳因素的共同影響，目前認(rèn)為，腦梗死和腦動脈粥樣硬化性狹窄是多基因遺傳疾病，在遺傳和環(huán)境因素的相互作用下發(fā)生，環(huán)境因素在遺傳的

6、基礎(chǔ)上起作用,環(huán)境因素長期積累可以促進(jìn)遺傳基因變異效應(yīng)的表達(dá)。研究表明，腦動脈粥樣硬化性狹窄具有種族和地域差異,在亞洲人群，特別是中國人群，顱內(nèi)動脈粥樣硬化性狹窄（intracranial artery atherosclerosis stenosis， ICAS）的發(fā)病率顯著高于西方人群。因此，很有必要針對中國人群CAAS形成以及影響?yīng)M窄顱內(nèi)外分布的傳統(tǒng)危險因素及遺傳易感因素進(jìn)行研究。
　　腦大動脈粥樣硬化狹窄的形成及狹窄在顱內(nèi)

7、外分布情況可能受到傳統(tǒng)危險因素，如：年齡、吸煙、男性、高血壓、糖尿病、血脂紊亂等的影響，同時也受到遺傳因素的影響。
　　血漿血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是迄今發(fā)現(xiàn)的最有效的血小板激活劑，具有多種生物學(xué)活性，通過免疫促炎、促血栓形成、興奮性氨基酸釋放、自由基產(chǎn)生、鈣離子超載、即早基因表達(dá)等途徑，在腦梗死發(fā)生發(fā)展的病理過程中起著重要作用。已經(jīng)證明，PAF參與了腦梗死的發(fā)生發(fā)展病理過程，

8、與動脈粥樣硬化、缺血性腦卒中的轉(zhuǎn)歸密切關(guān)聯(lián)。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)，中國人血PAF含量與年齡呈顯著正相關(guān)，中年后已具統(tǒng)計學(xué)差異，腦梗死患者血漿和腦梗死模型鼠腦組織中PAF含量明顯高于對照組。
　　PAF的代謝失活由血漿型血小板活化因子乙酰水解酶（platelet-activating factor acetylhydrolase，PAF-AH）所催化。血漿型PAF-AH基因9號外顯子上存在導(dǎo)致功能缺陷的基因突變：Val279Phe(位

9、于9號外顯子，994；C→A)，與日本人群腦梗死顯著相關(guān)。我們既往研究中發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者血漿型PAF-AH基因Val279Phe突變基因型及突變等位基因顯著增高，Val279Phe突變與中國人腦梗死顯著相關(guān)，其相關(guān)性主要來源于大動脈粥樣硬化性腦梗死。另外，在多個人群中還發(fā)現(xiàn)血漿型PAF-AH基因存在Arg92His(位于4號外顯子，275；G→A)、Ile198Thr(位于7號外顯子，593；T→C)、Ala379Val（位于11號外顯

10、子，1136；T→C）基因多態(tài)性。其中，Arg92His和Ile198Thr基因位點多態(tài)性，也已經(jīng)被證實存在于中國人群。
　　有關(guān)腦梗死與其相關(guān)易感基因多態(tài)性關(guān)系的研究一直是熱點之一，但迄今為止，仍缺乏關(guān)于腦動脈粥樣硬化性狹窄，特別是顱內(nèi)動脈粥樣硬化性狹窄，易感基因的研究。目前，有關(guān)PAF-AH基因多態(tài)性與腦梗死的研究集中于Val279Phe位點，Arg92His、Ile198Thr位點多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系仍不清楚，而上述3個位點

11、與腦動脈粥樣硬化性狹窄顱內(nèi)、顱外分布的關(guān)系，尚未見報道。
　　結(jié)合既往研究，PAF-AH某些基因位點多態(tài)性與腦梗死，特別是大動脈粥樣硬化型腦梗死有關(guān)。我們推測：PAF-AH基因位點多態(tài)性也可能參與腦動脈粥樣硬化性狹窄形成機(jī)制的主要環(huán)節(jié)，并在狹窄的發(fā)生、發(fā)展及顱內(nèi)顱外分布中起著重要作用。因此，本研究選擇血漿型PAF-AH基因Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位點多態(tài)性，就其與腦梗死和腦動脈粥樣硬化性狹窄及狹窄顱

12、內(nèi)外分布的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　本研究包括兩部分內(nèi)容：
　　1.研究血漿型PAF-AH基因Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位點多態(tài)性與大動脈粥樣硬化性腦梗死及腔隙性腦梗死的關(guān)系；
　　2.研究血漿型PAF-AH基因Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位點多態(tài)性與腦動脈粥樣硬化性狹窄及狹窄顱內(nèi)外分布的關(guān)系。
　　第一章血漿型PAF-AH基因多態(tài)性與中國漢族人群腦梗死的關(guān)聯(lián)性

13、研究
　　目的：檢測腦梗死患者血漿型 PAF-AH基因 Arg92His、Ile198The、Val279Phe位點基因型和等位基因，探討上述位點多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死及腔隙性腦梗死的關(guān)系。
　　材料和方法：入選在廣東省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院診斷為腦梗死的477例患者為病例組，根據(jù)全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議中腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合TOAST病因分型，將所有患者分為2組：大動脈粥樣硬化相關(guān)性腦梗死患者356例（LAA組），

14、小動脈性（腔隙性）腦梗死患者121例（SAO組）。123例對照組患者經(jīng)神經(jīng)影像檢查（頭顱CT或MR）未見梗死灶，排除腦梗死。收集有關(guān)臨床資料和血液標(biāo)本，采用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測（PCR-LDR）技術(shù)，檢測所有入組患者血漿型PAF-AH基因Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位點的基因型和等位基因，分析上述3個位點多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死及腔隙性腦梗死的相關(guān)性，同時比較相關(guān)危險因素與大動脈粥樣硬化性腦梗死和腔

15、隙性腦梗死的關(guān)系。
　　結(jié)果：各組基因型分布均符合 Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。LAA組與對照組比較， Arg92His、Val279Phe位點基因型頻率和等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0125）；Ile198Thr位點基因型頻率和等位基因頻率分布無顯著性差異（P＞0.0125）。SAO組與對照組比較，Arg92His、Ile198Thr和Val279Phe位點基因型頻率和等位基因頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意

16、義（P＞0.0125）。
　　經(jīng)卡方檢驗，LAA組與對照組在性別、吸煙、飲酒、高血壓病、糖尿病、高同型半胱氨酸血癥、血高密度脂蛋白降低的分布上有顯著性差異（P<0.0125）。高齡、男性、高血壓病、糖尿病、冠心病在SAO組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0125）。進(jìn)一步logistic逐步回歸分析顯示，男性、高血壓、糖尿病、高同型半胱氨酸血癥、Arg92His和Val279Phe位點多態(tài)性為導(dǎo)致大動脈粥樣硬化型腦梗死的危

17、險因素（OR分別為2.56，3.33，3.30，2.01，0.45，0.25）。男性、高血壓病、糖尿病為腔隙性腦梗死的危險因素（OR為3.08，3.51，3.40）。
　　結(jié)論：1. Arg92His、Val279Phe位點多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死的發(fā)生有關(guān)，與腔隙性腦梗死無關(guān)。Ile198Thr位點多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死和腔隙性腦梗死均無關(guān)。
　　2.男性、高血壓病、糖尿病、高同型半胱氨酸血癥為導(dǎo)致大動脈粥樣

18、型腦梗死的危險因素。男性、高血壓病、糖尿病為腔隙性腦梗死的危險因素。
　　第二章血漿型PAF-AH基因多態(tài)性與中國漢族人群腦動脈粥樣硬化性狹窄及狹窄顱內(nèi)外分布的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的:檢測患者血漿型 PAF-AH基因 Arg92His、Ile198The、Val279Phe位點基因型和等位基因，探討上述位點多態(tài)性與腦動脈粥樣硬化性狹窄的關(guān)系，并首次分析上述位點多態(tài)性與腦動脈狹窄顱內(nèi)外分布的關(guān)聯(lián)性。
　　材料和方法:入選在

19、廣東省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科行經(jīng)DSA檢查的600例患者。病例（CAAS）組患者477例（根據(jù)全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議中腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合TOAST病因分型，診斷為大動脈粥樣硬化型腦梗死或腔隙性腦梗死），存在任意腦大動脈粥樣硬化性狹窄率≥50%。根據(jù)狹窄部位，將CAAS組患者分為3個亞組：單純顱內(nèi)動脈狹窄（ICAS）組251例，單純顱外動脈狹窄（ECAS）組115例，顱內(nèi)外動脈聯(lián)合狹窄（IECAS）組111例。對照組123例，經(jīng)神經(jīng)影像檢

20、查（頭顱CT或MR）未見梗死病灶，DSA檢查腦動脈狹窄率＜50%或未見腦動脈狹窄。收集有關(guān)臨床資料和血液標(biāo)本，采用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測（PCR-LDR）技術(shù)，檢測血漿型PAF-AH基因Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位點的基因型和等位基因，分析上述3個基因位點多態(tài)性和相關(guān)危險因素與腦動脈粥樣硬化性狹窄及狹窄顱內(nèi)外分布的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果：各組基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。

21、r>　　Arg92His位點基因型頻率和等位基因頻率分布，在CAAS組與對照組比較差異有顯著性(P＜0.05)；ICAS亞組與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.007)，在ECAS組和IECAS組分別與對照組比較，差異均無顯著性(P＞0.007)。與GG基因型比較，突變AA/AG基因型酶活性顯著下降(P＜0.05)。
　　Val279Phe位點基因型頻率分布在CAAS組與對照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)，等位基因在CA

22、AS組與對照組比較有顯著差異(P＜0.05)。ICAS、ECAS、IECAS亞組的基因型頻率和等位基因型頻率分布與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.007）。與CC基因型比較，突變AA/AC基因型酶活性顯著下降(P＜0.05)。
　　Ile198Thr位點基因型頻率和等位基因頻率在CAAS組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在動脈狹窄亞組，基因型頻率及等位基因頻率分布與對照組比較均無顯著差異（P＞0.007）。

23、與TT基因型比較，突變CT基因型酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　男性、高血壓病、糖尿病、高同型半胱氨酸血癥、高密度脂蛋白降低與腦動脈狹窄獨(dú)立相關(guān)（P＜0.05）。高血壓病、糖尿病、飲酒、高同型半胱氨酸血癥與單純顱內(nèi)動脈狹窄獨(dú)立相關(guān)（P＜0.05）。男性、飲酒、高血壓病、糖尿病與單純顱外動脈狹窄獨(dú)立相關(guān)（P＜0.05）。男性、高血壓病、糖尿病與顱內(nèi)外動脈聯(lián)合狹窄獨(dú)立相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1. Arg9