曲古抑菌素A對(duì)胰腺癌細(xì)胞PANC-1凋亡和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的:采用不同濃度的曲古抑菌素A(TSA)作用于人胰腺癌細(xì)胞PANC-1，從細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、抑制率及凋亡率來研究TSA對(duì)人胰腺癌細(xì)胞PANC-1的凋亡誘導(dǎo)作用，并通過檢測不同濃度TSA作用PANC-1細(xì)胞后存活細(xì)胞內(nèi)凋亡、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和Notch通路表達(dá)的變化，探討TSA誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡機(jī)制以及對(duì)存活細(xì)胞的影響。
　　 方法:通過倒置顯微鏡和Hoechst33258染色觀察TSA作用后PANC-1細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;MTT比

2、色法檢測TSA對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖的抑制作用;用流式細(xì)胞術(shù)Annexin(Ⅴ)-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡;熒光PCR方法檢測腫瘤凋亡相關(guān)基因(survivin、c-myc、p53、bcl-2、bax)、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MMP1、MMP2)以及Notch通路相關(guān)基因的改變;蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測細(xì)胞內(nèi)bcl-2、bax、caspase-3、E-Cadherin，vimentin;細(xì)胞免疫化學(xué)和蛋白免疫印跡法

3、兩種方法檢測Notch受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)。
　　 結(jié)果:TSA顯著抑制人胰腺癌細(xì)胞PANC-1生長，并且具有濃度時(shí)間依賴性，MTT比色法顯示隨著TSA濃度增加和作用時(shí)間的延長，對(duì)PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用亦逐漸增強(qiáng);Hoechst33258染色和Annexin(Ⅴ)-FITC/PI檢測發(fā)現(xiàn)PANC-1細(xì)胞的凋亡率隨著TSA濃度增加而逐漸增多;熒光PCR結(jié)果顯示，經(jīng)TSA處理后，存活的PANC-1細(xì)胞內(nèi)Notch通路相關(guān)基

4、因以及與凋亡、轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因在mRNA水平有顯著改變;Western Blot檢測示，TSA可以上調(diào)Bcl-2，caspase-3，vimentin和NICD蛋白的表達(dá);相反，Bax和E-Cadherin表達(dá)下調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 (1) TSA具有抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的作用，并具有濃度時(shí)間依賴性。
　　 (2)TSA具有誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞PANC-1凋亡的作用，并具有濃度依賴性。
　　 (3)經(jīng)TSA處理