機(jī)械牽張力與晚期糖基化終末產(chǎn)物協(xié)同促進(jìn)小鼠血管平滑肌細(xì)胞MAPKs激活的研究.pdf

1、目的：
　　 用機(jī)械牽張力(Strech stress)和/或晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)刺激體外培養(yǎng)的小鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，研究機(jī)械牽拉力和/或晚期糖基化終末產(chǎn)物對(duì)VSMCs生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制，探討高血壓與糖尿病協(xié)同促進(jìn)血管重構(gòu)(vascular remodeling，VR)發(fā)生

2、的機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 (1)體外分離小鼠主動(dòng)脈中膜，組織塊貼壁法原代培養(yǎng)VSMCs，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)鑒定(分別用光鏡、電鏡和Westernblot等方法)。
　　 (2)將BSA和葡萄糖按一定比例溶解在磷酸緩沖液中，進(jìn)行透析后孵育，獲得AGE-BSA；用瓊脂糖凝膠電泳和熒光光度法鑒定糖基化的AGE-BSA和BSA。
　　 (3)用不同濃度或時(shí)間點(diǎn)的AGEs作用于VSMCs，用Wester

3、n blot的方法檢測(cè)MAPKs的激活；
　　 (4)用不同強(qiáng)度或作用時(shí)間的機(jī)械牽張力作用于VSMCs，用Western blot的方法檢測(cè)MAPKs的激活；
　　 (5)用AGEs和機(jī)械牽張力共同作用于VSMCs，用Westernblot的方法檢測(cè)MAPKs的激活。
　　 結(jié)果：
　　 (1)7天左右有細(xì)胞從組織塊中長(zhǎng)出，14天鋪滿培養(yǎng)瓶。細(xì)胞呈長(zhǎng)梭型和谷峰樣的外觀，細(xì)胞表達(dá)平滑肌特異抗原α-actin

4、(SM-α-actin)。
　　 (2)孵育8w后，獲得的AGE-BSA呈棕色，BSA呈透明；經(jīng)電泳分離后，用考馬斯亮藍(lán)染色，顯示AGE-BSA對(duì)應(yīng)的條帶分子量大于BSA，遷移率相對(duì)的較BSA慢；經(jīng)熒光光度法鑒定，可見用370nm單光入射激發(fā)AGE-BSA后，可見其在440～450nm處呈現(xiàn)峰值，其熒光強(qiáng)度是BSA的6-13倍。
　　 (3)Western blot顯示：機(jī)械牽拉力和AGEs均可以導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)