波葉青牛膽化學(xué)組分分析及其對實驗性2型糖尿病腎病小鼠藥效研究.pdf

1、波葉青牛膽（Tinospora crispa L.）來源于防己科（Menispermaceae）青牛膽屬植物波葉青牛膽的藤莖，其特點是毒性小、無致畸和誘變作用，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、降血糖等作用。
　　糖尿病腎?。―iabetic Nephropathy，DN）是糖尿病最常見、最嚴重的并發(fā)癥之一，且發(fā)病機理復(fù)雜尚不清楚，目前對其治療尚無安全有效的方法，因此研究開發(fā)一種安全性高、療效穩(wěn)定、副作用小的藥物對補充藥物治療的

2、不足具有重要意義。本文對波葉青牛膽化學(xué)成分進行了定性定量分析;乙醇提取物的急性毒性研究;乙醇提取物對STZ聯(lián)合高脂飼料誘導(dǎo)的2型糖尿病腎病小鼠的療效研究，并且通過體內(nèi)篩選有效部位;最后對其治療糖尿病腎病的有效活性部位進行了指紋圖譜研究，并且經(jīng)過LC-MS分析鑒定其主要有效化學(xué)成分。
　　(1)對波葉青牛膽化學(xué)成分進行了定性定量分析。目前對波葉青牛膽研究報道較少，國內(nèi)幾乎沒有文獻報道，本文通過化學(xué)試劑顏色反應(yīng)對波葉青牛膽中大類化學(xué)成

3、分進行了初步測定，并且根據(jù)顯色反應(yīng)結(jié)果對其含有的化學(xué)成分進行了定量分析，結(jié)果表明其主要成分為生物堿類、多酚類、二萜內(nèi)脂類、三萜皂苷類以及黃酮類。其中萜類成分含量最多。
　　(2)研究波葉青牛膽對小鼠的急性毒性。本實驗采用ICR小鼠為實驗對象，采用改良寇氏法測定波葉青牛膽乙醇提取物的LD50，結(jié)果表明波葉青牛膽乙醇提取物L(fēng)D50為4819mg/kg，屬于低毒類中藥。從給藥組小鼠的病理切片觀察可知，其主要毒副作用為肝毒性，表現(xiàn)為肝臟嚴

4、重出血及空泡變性。對小鼠的腎臟無損傷作用。
　　(3)乙醇提取物對STZ聯(lián)合高脂飼料誘導(dǎo)的2型糖尿病腎病小鼠的療效研究。采用高脂飲食聯(lián)合單次小劑量注射STZ(80mg/kg)復(fù)制2型糖尿腎病(DN)小鼠模型。將80只造模成功的ICR小鼠分為模型組，TCEE低、中、高劑量組(155mg/kg，310mg/kg，620 mg/kg)，CHCl3部位組(48mg/Kg)、EtOAc部位組(50mg/Kg)、BuOH部位組(126mg/K

5、g)、水溶性部位組劑量組（295mg/kg），以及卡托普利(3.13mg/kg)、消渴丸陽性藥組(937.5mg/kg)，并且設(shè)立正常對照組，共給藥6周。18周末測定各組小鼠血清中總膽固醇、尿素氮、肌酐、胱抑素C水平，PAS染色觀察腎臟病理變化。結(jié)果表明:TCEE高劑量組和BuOH部位組能顯著降低DN小鼠各血清生化指標水平以及緩解腎小球肥大，腎小球基底膜增厚，系膜增生等病理變化。
　　(4)對波葉青牛膽正丁醇部位RP-HPLC分析

6、方法，流動相條件為:乙腈(:)0.02％三氟乙酸水溶液梯度洗脫(0-5min，2％∶98％～6％∶94％;5-20min，6％∶94％～15％∶85％;20-25min,15％∶85％;25-30min,16％∶84％;30-35min,17％∶83％;35-40min,17％∶83％～20％∶80％;40-53min,20％∶80％～38％∶62％;53-60min,38％∶62％)。通過LC-MS分析其主要化學(xué)成分，推測可能含有的2