人大腸粘膜移植導致裸鼠急性肝壞死機制研究.pdf

1、為了發(fā)現(xiàn)人類大腸粘膜相關淋巴細胞歸巢與大腸癌肝轉移的關系，我們將來自6例大腸癌患者手術切除新鮮標本，形態(tài)學為正常的大腸粘膜移植于裸鼠皮下，結果導致受體裸鼠急性肝壞死(ALF)發(fā)生，該裸鼠血清可向免疫缺陷小鼠(裸鼠和SCID鼠)傳遞相同的肝損傷疾病。進一步研究顯示，無論是粘膜移植，還是上述血清，對免疫力正常的BALb/c鼠不致病，如果將正常BALB/C小鼠的外周血單個核細胞輸入裸鼠，對血清攻擊具有保護效應；如果使用上述血清攻擊后的BALb

2、/c小鼠的外周血單個核細胞或血清輸入裸鼠，其保護作用更強。本文主要對上述肝損傷現(xiàn)象的病因和發(fā)病機制進行了初步探討，在受到致病血清攻擊后的BALb/c鼠血清，抗MHV抗體陽性，粘膜供體患者血清抗MHV抗體弱陽性，但免疫組化和電鏡未查到明確病毒顆粒。病鼠的外周血CD3升高，CD4+/CD8+降低，血清TNF、IL-1、IL-2均有不同程度升高；肝組織免疫組化顯示CD8+細胞聚集。具體結果如下：①發(fā)病率和死亡率：粘膜移植組91.67％(22/

3、24)，血清傳遞組100％(40/40，4只×10代)，兩組病鼠死亡率均為100％。對照組和BALb/c組無發(fā)病。 ②肝功異常(轉氨酶升高，白球比倒置，膽紅素升高以及膽汁血癥)。 ③普通病理學。 移植之大腸粘膜在術后5天即失去大部分細胞核形態(tài)，但絨毛和細胞輪廓可存在4周以上。 病鼠肝臟在H-E染色光鏡觀察下主要表現(xiàn)為肝小葉內和匯管區(qū)炎性細胞浸潤、碎屑樣壞死、片狀壞死等，可見凋亡小體、肝細胞再生、纖維化等；

4、肺、腎、腸無明顯病變。 ④超微病理學，透射電鏡下可觀察到肝細胞壞死，各種白細胞浸潤，纖維增生，未見明確病毒顆粒和細菌等其他病原體。 ⑤免疫學：外周血WBC，粘膜移植組、粘膜懸液組輕度升高，3天后正常，血清傳遞組無明顯變化；與正常裸鼠比較，病鼠外周血CD3比例升高，CD4/CD8無明顯改變；血TNF、IL-1、IL-2輕度升高；免疫組化顯示肝組織浸潤之淋巴細胞(CD4和CD8陽性細胞)較正常裸鼠增加，F(xiàn)as配體表達陰性。

5、 ⑥病原學，病鼠血清檢測A、B、C、D四種人類病毒標志物和小鼠肝炎病毒(MHV)均為陰性，血清傳遞后BALb/c鼠的MHV陽性；全血細菌培養(yǎng)陰性；LPS水平在粘膜移植組和粘膜懸液組升高，1周時正常，血清傳遞組無升高。 ⑦保護實驗中，BALb/c單個核細胞和免疫后的BALb/c鼠血清對血清傳遞裸鼠有明顯保護效應，表現(xiàn)為成活期明顯延長(30天以上)，肝臟病變輕微。 ⑧血漿可疑新蛋白分子：SDS-PAGE血漿蛋白電泳，在

6、40KD處發(fā)現(xiàn)異常帶(P40)，純化后分析N端15個氨基酸序列，高度提示為新蛋白分子；P40血漿濃度在裸鼠隨病情加重而增加，在BALb/c鼠則隨時間降低，但是，純化后的P40單獨不能導致相同病變。 結論：①本實驗模型較其他ALF動物模型更加接近人類病變的自然過程和各種臨床指標。②本實驗證實了ALF是機體的細胞免疫缺陷狀態(tài)，加上來自于腸粘膜的致病因子所致。③本實驗病鼠肝組織病理改變可見凋亡小體，但Fas配體表達陰性。④本實驗發(fā)現(xiàn)P