鯉春病毒血癥病毒和水霉菌誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生的研究.pdf

1、近年來，許多研究表明，多種微生物感染會(huì)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生，氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的組織損傷也是微生物感染的致病機(jī)理之一。微生物感染與氧化應(yīng)激之間存在多種病理學(xué)關(guān)聯(lián)越來越受到關(guān)注，但是針對(duì)水生動(dòng)物微生物感染與氧化應(yīng)激的關(guān)系少有人研究。本研究以兩種水生動(dòng)物中常見的病原微生物-鯉春病毒血癥病毒(SpringViraemia of Carp Virus，SVCV)和水霉菌(Saprolegnia)為研究對(duì)象，探討水生動(dòng)物微生物感染與氧化應(yīng)激之間的關(guān)聯(lián)，

2、為深入研究水生動(dòng)物微生物感染的致病機(jī)理提供理論基礎(chǔ)，以便為水生動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療提供新的解決策略。主要研究結(jié)果如下:
　　1.SVCV感染EPC細(xì)胞誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生的研究分別以0.1和1 MOI的SVCV感染黑頭軟口鰷上皮瘤細(xì)胞(Epithelioma PapulosumCyprini，EPC)，測(cè)定SVCV感染EPC細(xì)胞0、3、6、12和24h后氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，以H2O2刺激EPC細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激作為陽性對(duì)照。氧化應(yīng)激指標(biāo)包

3、括:氧化水平-活性氧自由基(ROS)、蛋白質(zhì)羰基、8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA);抗氧化水平:總抗氧化能力(T-AOC)、還原型谷胱甘肽(GSH)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶（Gpx）。同時(shí)通過Real-time PCR檢測(cè)谷胱甘肽合成酶(GSS)基因、過氧化氫酶(CAT)基因和超氧化物歧化酶1（SOD-1）基因的轉(zhuǎn)錄水平。最后定量檢測(cè)SVCV-G的轉(zhuǎn)錄水平來分析H2O2預(yù)處理E

4、PC細(xì)胞SVCV感染的影響。結(jié)果顯示:1.）SVCV感染EPC細(xì)胞后，細(xì)胞氧化水平:ROS水平和蛋白質(zhì)羰基含量先顯著升高，12h恢復(fù)到正常水平，24h又升高到更高水平;8-OHdG水平顯著升高，直到24h; MDA含量無顯著變化。細(xì)胞抗氧化水平:T-AOC顯著升高直到24h;GSH含量和GSS基因轉(zhuǎn)錄水平顯著升高直到24 h(1MOI); CAT活性和基因轉(zhuǎn)錄水平顯著降低，12h恢復(fù)到正常水平，24h又顯著降低;SOD活性和SOD-1基

5、因轉(zhuǎn)錄水平先顯著升高，6h迅速恢復(fù)到正常水平直到24h;Gpx活性顯著升高直到24h。ROS/T-AOC顯著降低，直到12h降低到最低水平，24h又顯著升高到更高水平。
　　結(jié)果表明病毒感染EPC細(xì)胞產(chǎn)生大量的ROS，造成DNA和蛋白質(zhì)嚴(yán)重的氧化損傷，同時(shí)ROS的蓄積激活了Nrf2，細(xì)胞上調(diào)內(nèi)源性抗氧化酶基因的表達(dá)及其活性，造成總抗氧化能力的代償性升高，但不足以抵抗病毒感染產(chǎn)生的ROS蓄積，從而致使細(xì)胞內(nèi)氧化還原失衡，引發(fā)氧化應(yīng)激

6、。2.）500μM H2O2刺激EPC細(xì)胞2h后ROS水平顯著升高，細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)可抑制病毒的復(fù)制，降低SVCV-G基因的轉(zhuǎn)錄水平。
　　2.水霉菌感染鯉誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生的研究以感染水霉病的鯉為研究對(duì)象，測(cè)定患水霉病鯉血漿中氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，包括總抗氧化能力(T-AOC)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(Gpx)和過氧化氫酶(CAT

7、)，同時(shí)隨機(jī)取患病組鯉的肝胰臟、脾臟和腎臟組織進(jìn)行組織病理分析，旨在探討氧化應(yīng)激同水霉菌致病機(jī)理的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果顯示:1.）患病組相對(duì)于對(duì)照組，魚體血漿T-AOC極顯著降低(p＜0.01); MDA含量和GSH含量無顯著變化;SOD和CAT酶活極顯著降低(p＜0.01); Gpx酶活顯著升高(p＜0.05)，表明鯉患水霉病后魚體內(nèi)氧化-抗氧化水平失衡，魚體產(chǎn)生氧化應(yīng)激。2.）組織病理學(xué)分析顯示患水霉病鯉的肝臟細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組出現(xiàn)