靶向于Nrf2-ARE信號的抗鯉春病毒血癥病毒研究.pdf

1、前期研究發(fā)現(xiàn)，鯉春病毒血癥病毒（Spring Viraemia of Carp Virus，SVCV）感染EPC細胞可以誘導氧化應激，下調血紅素加氧酶1(Heme oxygen-1，HO-1)的表達，擾亂細胞內氧化還原平衡，造成DNA和蛋白質氧化損傷，是SVCV重要的致病機制之一。Nrf2-ARE是機體對抗氧化應激最重要的內源性信號通路，由Nrf2介導的下游效應基因在細胞抗氧化、抗炎癥、抗凋亡等過程中發(fā)揮著關鍵性作用，并參與到多種病毒的

2、感染和復制過程中。為此，本研究系統(tǒng)探討了Nrf2-ARE信號通路與SVCV之間的相互作用關系，其結果有助于深入了解SVCV的致病機理，為SVCV的預防和治療提供新的解決方案。主要研究結果如下:
　　1.激活劑SFN和CDDO-Me對Nrf2-ARE信號通路的激活效果以及對SVCV復制的影響
　　用MTT法測定了Nrf2的激活劑SFN和CDDO-Me對FHM細胞的LD50(48h)分別為37.65μM和6.823μM。接著，通

3、過RT-qPCR和Western blot在細胞水平上檢測兩種激活劑對FHM細胞Nrf2-ARE信號通路的激活效果。結果顯示，SFN處理前期Nrf2及下游效應基因HO-1和SOD1的轉錄水平略微升高，在12h達到峰值，24h又恢復到正常水平。CDDO-Me處理組，Nrf2轉錄水平持續(xù)升高并在24h具有顯著性差異;HO-1在3h、6h顯著降低，12h恢復至正常水平，24h又顯著性升高;SOD1轉錄水平在3h到24h持續(xù)升高。Nrf2和HO

4、-1蛋白的表達量，在兩種激活劑處理16h后都顯著高于對照組?？偪寡趸芰z測結果顯示，兩種激活劑都能顯著提高FHM細胞的總抗氧化能力，尤其是在刺激12h時細胞的抗氧化能力最強。上述結果表明，激活劑SFN和CDDO-Me刺激FHM細胞可以激活Nrf2-ARE信號通路，提高細胞總抗氧核能力。接著分別用兩種激活劑預處理FHM細胞，再以0.1MOI的SVCV感染，RT-qPCR檢測SVCV-G基因的轉錄水平并測定病毒滴度。結果顯示，兩種激活劑預

5、處理在12h和24h極顯著降低SVCV-G基因的轉錄水平，降低病毒滴度，抑制SVCV的復制。
　　2.Nrf2和HO-1敲降對SVCV復制的影響
　　以Nrf2-siRNA和HO-1-siRNA轉染FHM細胞，RT-qPCR、Western blot檢測Nrf2-ARE信號通路的抑制情況并定量檢測SVCV-G基因的轉錄水平。結果顯示，Nrf2-siRNA處理后能夠顯著降低Nrf2、HO-1和SOD1的轉錄水平，抑制Nrf2和