兔眼藍(lán)莓葉片再生及多倍體誘導(dǎo)的研究.pdf

1、本研究以兔眼藍(lán)莓的杰兔品種為實(shí)驗(yàn)材料，通過組織培養(yǎng)建立了葉片再生體系及通過石蠟切片的方法對再生過程進(jìn)行了細(xì)胞組織學(xué)觀察，并采用秋水仙素處理藍(lán)莓離體莖尖誘導(dǎo)多倍體，對多倍體進(jìn)行了鑒定，為兔眼藍(lán)莓的組織快繁及培育新品種奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.建立了高頻、高效的兔眼藍(lán)莓離體葉片再生體系。以WPM為基本培養(yǎng)基，添加1.4～1.7mg/LZT，在離葉尖1/3的位置橫切葉片成兩部分來接種，先暗培養(yǎng)20d（25±2℃）后再光照培

2、養(yǎng)(14h光照/10h黑暗，2000lux，25±2℃）的條件下，誘導(dǎo)再生苗的效果最佳，誘導(dǎo)率最高達(dá)86.8％。
　　2.離體葉片再生主要是通過直接器官發(fā)生途徑，再生的不定芽主要起源于葉脈維管束的薄壁細(xì)胞。培養(yǎng)3d左右時(shí)時(shí)脈中薄壁細(xì)胞中出現(xiàn)核大、胞質(zhì)濃厚的細(xì)胞;接著這些細(xì)胞分裂形成分生組織細(xì)胞團(tuán)，然后突破葉片上表皮，進(jìn)而分化成不定芽、發(fā)育成苗。離體葉片再生苗的形成具有叢生性特性和不同步性，分生組織細(xì)胞團(tuán)最早突破葉片上表皮是在培養(yǎng)的

3、第12天左右。
　　3.取離體葉片再生芽苗的莖尖進(jìn)行共培養(yǎng)誘導(dǎo)多倍體，50mg/L秋水仙素處理50d和60mg/L秋水仙素處理40d時(shí)，誘導(dǎo)植株變異的效果最佳，變異率均達(dá)30％以上，有利于多倍體的發(fā)生。
　　4.通過去壁低滲火焰法制片，對未經(jīng)誘導(dǎo)處理的植株與變異植株進(jìn)行染色體觀察與計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)未經(jīng)處理的杰兔品種的染色體數(shù)為2n=6X=72，為六倍體，誘導(dǎo)加倍后的多倍體植株染色體數(shù)目明顯增多，大于72條。誘導(dǎo)的多倍體植株呈現(xiàn)出生