CD133+腫瘤起始細(xì)胞及微環(huán)境在膽囊癌進(jìn)展中的作用及晚期膽囊癌化療新方案研究.pdf

1、目的:
　　膽囊癌具有惡性程度高，手術(shù)切除率低，放化療不敏感，預(yù)后差的特點。本研究旨在明確人膽囊癌CD133+細(xì)胞的純化及其腫瘤起始細(xì)胞特性（Tumor initiating cells，TICs）的鑒定；晚期膽囊癌化療新方案的客觀有效性及患者生活質(zhì)量與安全性評估。
　　方法：
　　免疫磁珠法分選CD133+細(xì)胞亞群后，以免疫熒光法定位檢測CD133蛋白表達(dá)和流式細(xì)胞儀檢測CD133+細(xì)胞亞群含量。半定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

2、檢測CD133mRNA表達(dá)，免疫蛋白印跡實驗檢測CD133蛋白表達(dá)。同時，檢測CD133+細(xì)胞亞群的體內(nèi)成瘤能力和單克隆形成能力。CCK8法檢測CD133+細(xì)胞亞群的增殖能力和耐抗腫瘤藥特性，Transwell法檢測CD133+細(xì)胞亞群的侵襲能力。進(jìn)而，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法鑒定相關(guān)干細(xì)胞基因的表達(dá)。采用隨機(jī)、對照、開放、多中心研究傳統(tǒng)化療和聯(lián)合化療方案對晚期膽囊癌患者的有效性及安全性。
　　結(jié)果：
　　第一部分，GBC

3、-SD細(xì)胞經(jīng)免疫磁珠分選后CD133+細(xì)胞定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞漿。CD133+組CD133 mRNA和蛋白相對灰度值顯著高于CD133-組。CD133+組細(xì)胞克隆球形成率顯著高于CD133-組。CD133+組與未分選組成瘤率分別為100%和60%，而CD133-組不成瘤。CD133+組細(xì)胞增殖能力顯著強(qiáng)于CD133-組(P<0.05)。經(jīng)氟尿嘧啶(0.1μg/ml)和吉西他濱(1μg/ml)處理后，CD133+組細(xì)胞的藥物敏感性顯著低于C

4、D133-組。CD133+組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著高于CD133-組。第二部分，CD133+組CXCR4、p-Akt與CD133蛋白相對灰度值顯著高于CD133-組。CD133+膽囊癌GBC-SD細(xì)胞中，SDF-1α或AMD3100可通過刺激或抑制SDF-1α/CXCR4軸表達(dá)上調(diào)或下降，進(jìn)而經(jīng)由Akt信號通路調(diào)控膽囊癌GBC-SD細(xì)胞CD133表達(dá)增加或減少。而抑制Akt信號通路可使膽囊癌細(xì)胞CD133表達(dá)下降。第三部分，傳統(tǒng)用藥組和化療新方

5、案組的總生存率（OS）和無進(jìn)展生存期（PFS）顯著高于傳統(tǒng)用藥組?；熜路桨附M的部分緩解率（PR）顯著高于傳統(tǒng)用藥組；和聯(lián)合用藥組的客觀有效率（CR+PR）顯著高于傳統(tǒng)用藥組?；熜路桨附M能顯著降低CA19-9和CEA水平。
　　結(jié)論:
　　1、免疫磁珠法可分離和純化人膽囊癌GBC-SD細(xì)胞中的CD133+細(xì)胞亞群，CD133+細(xì)胞具有較強(qiáng)的致瘤潛能、增殖能力、侵襲能力及對化療藥物不敏感，并表達(dá)部分干細(xì)胞相關(guān)基因。