膽囊癌微環(huán)境下MDSCs及其亞群細(xì)胞檢測(cè)和干預(yù)治療研究.pdf

1、研究背景:膽囊癌(Gallbladder Cancer)是膽道系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤。膽囊癌的病因及發(fā)病機(jī)制目前還未研究清楚。早期缺乏特異性臨床表現(xiàn)，致使診斷常被延誤，出現(xiàn)腹痛或黃疸等癥狀時(shí)多為中、晚期表現(xiàn)。此外，膽囊癌具有局部侵犯、廣泛區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的特性，是侵襲性最高的膽道系統(tǒng)腫瘤?；颊叨嘁蚰懝苁苣[瘤侵犯或出現(xiàn)肝十二指腸韌帶淋巴結(jié)、腹腔廣泛轉(zhuǎn)移等情況，出現(xiàn)黃疸、乏力和惡病質(zhì)等全身癥狀。絕大多數(shù)病人確診時(shí)已屬晚期，喪失了

2、有效治療的機(jī)會(huì)。雖然外科手術(shù)治療仍為臨床治療首選，徹底的手術(shù)切除仍是膽囊癌唯一有可能的治愈方式，但膽囊癌手術(shù)切除遠(yuǎn)期療效不能確定。膽囊癌對(duì)放療、化療均不敏感，目前臨床仍缺乏令人滿意的治療方案。發(fā)現(xiàn)和研究新的特異性治療方法是提高膽囊癌治療效果的迫切要求，多種治療方法聯(lián)合應(yīng)用的個(gè)體化綜合治療方案將是改善膽囊癌預(yù)后的希望所在。
　　目前研究表明，雖然機(jī)體免疫系統(tǒng)可以產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答，但腫瘤仍能在體內(nèi)不斷生長(zhǎng)。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，學(xué)界提出了“

3、腫瘤微環(huán)境”的概念。腫瘤微環(huán)境是腫瘤發(fā)生生長(zhǎng)過(guò)程中所處的內(nèi)環(huán)境，由腫瘤細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、免疫炎性浸潤(rùn)細(xì)胞、微血管、組織液及多種細(xì)胞因子等共同構(gòu)成。其代謝微環(huán)境的一個(gè)重要生物學(xué)特征即組織缺氧、間質(zhì)高壓、免疫炎性因子浸潤(rùn)。這些微環(huán)境中的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞趨化因子及免疫炎性因子與相關(guān)受體之間相互作用，促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)、增殖、侵襲及遷移。研究腫瘤微環(huán)境的復(fù)雜機(jī)制，對(duì)臨床改善腫瘤微環(huán)境、更為有效的治療腫瘤有著重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，髓源性抑制細(xì)胞(MDS

4、Cs)是來(lái)源于未成熟髓系細(xì)胞不同分化階段的異質(zhì)性細(xì)胞群體，在病理?xiàng)l件下可以誘導(dǎo)免疫抑制、介導(dǎo)免疫耐受，促使腫瘤逃逸機(jī)體的免疫監(jiān)視和攻擊，促進(jìn)慢性感染及腫瘤的發(fā)生發(fā)展，是一群在病理?xiàng)l件下產(chǎn)生的具有顯著的負(fù)向免疫調(diào)控功能的天然免疫細(xì)胞，集中分布在外周血、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓及腫瘤微環(huán)境等部位。MDSCs表面標(biāo)記具有顯著的異質(zhì)性，缺乏公認(rèn)的通用表型，在研究中采用目前應(yīng)用最多的人Lin-HLA-DR-CD33+和小鼠CD11b+Gr-1+表達(dá)模式

5、作為其表面標(biāo)志。通過(guò)消除MDSCs及其趨化因子受體亞群細(xì)胞，促進(jìn)不成熟的MDSCs分化為成熟的髓細(xì)胞，可以消除其對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制性，將有助于腫瘤的治療。如何有效降低MDSCs及其亞群細(xì)胞在活體中的數(shù)量和功能、減輕其對(duì)免疫細(xì)胞的抑制，將對(duì)癌癥和其他疾病的臨床治療起到重要作用。
　　研究目的:通過(guò)本課題的研究，對(duì)膽囊癌腫瘤微環(huán)境中的MDSCs及其趨化因子受體亞群細(xì)胞進(jìn)行篩選及鑒定，并進(jìn)一步通過(guò)調(diào)控MDSCs及亞群細(xì)胞，探討MDSCs參

6、與膽囊癌腫瘤微環(huán)境的免疫應(yīng)答變化及相關(guān)機(jī)制，通過(guò)阻斷腫瘤免疫逃逸過(guò)程以減輕腫瘤宿主機(jī)體的免疫抑制狀態(tài)，更加深入地認(rèn)識(shí)機(jī)體維持免疫穩(wěn)定、抑制自身免疫、控制移植排斥、調(diào)控感染免疫、以及腫瘤微環(huán)境中免疫功能狀態(tài)等方面的機(jī)制，從而為以誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的免疫干預(yù)措施來(lái)防治腫瘤免疫相關(guān)疾病提供有力的理論指導(dǎo)與實(shí)踐措施。
　　研究方法:
　?、偻ㄟ^(guò)采集人膽囊癌血樣及腫瘤組織，利用免疫組化及流式細(xì)胞技術(shù)定性、定量分析腫瘤組織微環(huán)境中MDS

7、Cs。
　　②通過(guò)人源性膽囊癌細(xì)胞系建立裸鼠荷瘤動(dòng)物模型，流式細(xì)胞術(shù)篩選、鑒定、定量分析腫瘤組織微環(huán)境中MDSCs及其趨化因子受體亞群細(xì)胞。
　?、弁ㄟ^(guò)建立藥物干預(yù)MDSCs亞群細(xì)胞裸鼠荷瘤模型，進(jìn)行了解MDSCs亞群細(xì)胞靶向調(diào)控對(duì)裸鼠膽囊癌腫瘤微環(huán)境影響的可行性研究。
　　研究結(jié)果:
　?、俪晒⒘巳嗽葱阅懩野┘?xì)胞裸鼠荷瘤動(dòng)物模型及MDSCs趨化因子受體干預(yù)模型;
　?、谕ㄟ^(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)人膽囊癌血樣、腫

8、瘤組織及荷瘤裸鼠的膽囊癌組織和脾臟組織進(jìn)行分析，分別檢測(cè)出表面標(biāo)志為L(zhǎng)in-HLA-DR-CD33+人膽囊癌MDSCs細(xì)胞和CD11b+Gr-1+荷瘤裸鼠MDSCs細(xì)胞;
　?、圻M(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分選鑒定MDSCs亞群細(xì)胞，檢測(cè)出CXCR2及CX3CR1亞群細(xì)胞，未鑒定出CCR2亞群細(xì)胞;
　?、芡ㄟ^(guò)干預(yù)MDSCs趨化因子受體亞群細(xì)胞后可以發(fā)現(xiàn):予以干預(yù)后各干預(yù)組瘤塊體積較對(duì)照組明顯減小;應(yīng)用替吉奧（以替加氟計(jì)）后，裸鼠腫

9、瘤組織及其脾臟組織MDSCs及其亞群比例較對(duì)照組趨勢(shì)明顯升高，維生素D3、塞來(lái)昔布、辛伐他汀及受體阻斷劑SBSS比例較對(duì)照組趨勢(shì)降低;受體阻斷藥物辛伐他汀對(duì)CX3CR1和SBSS對(duì)CXCR2的阻斷趨勢(shì)更為明顯。
　　研究結(jié)論:
　?、僭谌嗽葱阅懩野┘?xì)胞裸鼠荷瘤動(dòng)物模型所建立的膽囊癌腫瘤微環(huán)境中廣泛存在髓源抑制性細(xì)胞并可依據(jù)趨化因子受體不同可將膽囊癌腫瘤微環(huán)境及脾臟內(nèi)的MDSCs可以分為CXCR2及CX3CR1趨化因子受體亞群

10、細(xì)胞;
　?、谕瑫r(shí)針對(duì)MDSCs及趨化因子受體亞群細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)研究，發(fā)現(xiàn)能夠有效的改善腫瘤微環(huán)境、抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，研究發(fā)現(xiàn)雖然替吉奧對(duì)膽囊癌細(xì)胞具有明顯的殺傷效果，但與文獻(xiàn)報(bào)道不同，其對(duì)膽囊癌組織及其脾臟組織中的MDSCs的影響微小;
　?、蹜?yīng)用趨化因子受體阻斷劑辛伐他汀及SBSS，均能有效降低腫瘤微環(huán)境內(nèi)MDSCs及相應(yīng)亞群細(xì)胞的表達(dá)比例，在減少膽囊癌微環(huán)境中MDSCs聚積的同時(shí)阻斷了相應(yīng)趨化因子受體的表達(dá)。