TGF-β與Th類細胞因子“對話”在泡球蚴感染所致宿主病理損傷作用機制研究.pdf

1、目的：探討TGF-β與Th類細胞因子的“對話”在泡球蚴感染所致宿主病理損傷中的作用。
　　方法：⑴肉眼直視下肝臟穿刺建立泡球蚴感染小鼠模型：8-10周齡雌性BALB/c小鼠，隨機分為實驗組和對照組。乙醚麻醉，實驗組開腹直視下肝左葉注射0.1mL泡球蚴混懸液，絲線縫合關閉腹腔。對照組相同部位注射等量生理鹽水。感染2、8、30、60、90、180、270、360天處死小鼠，兩組均在肝左葉相同部位采集標本；⑵采用36k小鼠全基因組寡核苷

2、酸芯片分析 BALB/c小鼠肝泡球蚴感染動物模型，肝臟基因mRNA轉錄本含量的改變；確定目標基因并聯(lián)機檢索GeneBank等整合數(shù)據(jù)庫，按其生物功能進行分類。應用Gene Cluster3.0生物信息可視化分析軟件進行等級聚類分析。篩選肝臟免疫相關基因；⑶泡球蚴病人和泡球蚴感染小鼠肝臟組織，福爾馬林固定、石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。HE染色觀察病理變化，免疫組化方法、Western Blot和實時熒光定量RT-PCR檢測TGF-β1、Sm

3、ads、MAPK、肝細胞增殖和凋亡相關蛋白及mRNA的表達與分布，原位末端標記技術（TUNEL）檢測病灶肝細胞凋亡；⑷原位肝臟灌注法分離大鼠肝細胞，與泡球蚴囊液共培養(yǎng)，15min、30min、1h、2h、24h收集細胞，Western Blot檢測TGF-β1、Smads、MAPK相關蛋白的表達。
　　結果：⑴隨著泡球蚴感染時間的延長，肝損傷逐漸增加，肝纖維化程度增加，TGF-β1在泡球蚴感染所致的肝纖維化中具有促進作用；⑵泡球蚴

4、感染早期以Th1免疫反應為主，感染中期呈現(xiàn)出混合的Th1/Th2免疫反應，感染晚期免疫反應降低，化學趨化因子在泡球蚴感染過程中發(fā)揮著重要的作用，病灶旁肝組織促進了細胞因子和化學趨化因子的產(chǎn)生和活性；⑶在泡球蚴感染早期，IL-17A和IL-17F在病灶炎性帶組織和病灶旁肝組織中均高表達，感染晚期 IL-17A表達低于對照組，而IL-17F的表達雖有所降低，但仍高于對照組；⑷泡球蚴感染激活宿主肝細胞TGF-β/Smad信號通路，造成了肝纖維

5、化；⑸在泡球蚴感染的早期，以ERK1/2信號通路被激活，促進肝細胞的增殖；在感染的中期，以Gadd45β高表達，調控肝細胞的抗凋亡；在感染的晚期，以細胞凋亡蛋白p53、p21高表達，肝細胞發(fā)生生長抑制或凋亡。
　　結論：⑴泡球蚴感染TGF-β高表達，引起機體免疫抑制狀態(tài)的形成，造成泡球蚴的“免疫逃避”，同時導致宿主肝臟發(fā)生病理性損傷；⑵泡球蚴感染早期以Th1免疫反應為主，感染中晚期呈現(xiàn)出混合的Th1/Th2免疫反應，化學趨化因子在

6、泡球蚴感染過程中也發(fā)揮著重要的作用，病灶旁肝組織促進了細胞因子和化學趨化因子的產(chǎn)生和活性；⑶首次證明細胞因子和化學趨化因子，尤其是IL-17，在泡球蚴感染病灶旁炎性帶和病灶旁肝組織發(fā)揮著重要的作用，結果提示TGF-β對 IL-17不同的亞型表達及Treg具有調控作用，調節(jié)T細胞向特定方向分化，并誘導免疫細胞發(fā)生凋亡，從而介導泡球蚴的免疫逃避，同時造成宿主組織損傷；⑷我們的研究結果的提示，在泡球蚴感染宿主肝臟過程中，泡球蚴感染引起宿主炎癥

7、反應或泡球蚴自身，分泌TGF-β及炎癥/抗炎癥細胞因子，激活下游Smad信號通路，從而導致宿主肝臟發(fā)生纖維化；⑸在泡球蚴感染宿主肝臟的過程中，泡球蚴通過直接刺激（囊液中的有害成分、原頭蚴本身分泌的某些成分）或間接（引起宿主免疫系統(tǒng)分泌的TGF-β及相關細胞因子）刺激，產(chǎn)生細胞毒性，造成宿主細胞應激反應，激活宿主肝細胞MAPK信號通路（ERK和JNK信號通路）和細胞周期相關調控因子，影響宿主肝細胞周期、引起宿主肝細胞增殖、生長抑制、凋亡和

8、肝細胞功能改變等，最終導致宿主“肝腫大（感染早、中期）”或肝臟萎縮、變性甚至壞死（感染晚期）；⑹在泡球蚴感染的早期，以ERK1/2-Cyclin D1為主線的信號通路調控肝細胞的增殖；在感染的中期，以ERK1/2-Gadd45β（Cyclin A）-PCNA為主線的信號通路調控肝細胞的抗凋亡；在感染的晚期，以p53-p21-Cyclins和p53-Gadd45γ-JNK為主線的信號通路調控肝細胞的生長抑制或凋亡，從而造成宿主病理性肝損傷