魚(yú)類病毒性神經(jīng)壞死病毒的分離和部分特性研究.pdf

1、魚(yú)類病毒性神經(jīng)壞死病(Viralnervousnecrosis，簡(jiǎn)稱VNN)又稱病毒性腦病和視網(wǎng)膜病(Viralencephalopathyandretinopathy，VER)，是由魚(yú)類病毒性神經(jīng)壞死病毒(Viralnervousnecrosisvirus，簡(jiǎn)稱VNNV，屬于乙型野田村病毒屬)引起的一種新的傳染性疾病。是世界范圍的一種魚(yú)類流行性傳染病，該病最早于1985年報(bào)道于日本，現(xiàn)已遍及非洲外的所有地方。該病臨床上主要以魚(yú)苗出現(xiàn)神

2、經(jīng)異常為特征，表現(xiàn)為不正常游泳：螺旋狀游動(dòng)、在水中打轉(zhuǎn)、腹部向上浮于水面；組織病理以患病魚(yú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和視網(wǎng)膜中間層出現(xiàn)空泡為特征。中國(guó)臺(tái)灣和廣州分別從1997年和2001年開(kāi)始報(bào)道此病，目前已對(duì)我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重危害。國(guó)內(nèi)關(guān)于VNNV的報(bào)道集中在病理切片和核酸序列分析上，而關(guān)于此病毒在條紋月醴細(xì)胞系(stripedsnakehead，SSN1)分離培養(yǎng)及理化特性方面的報(bào)道較少。 從福建廈門(mén)收集發(fā)病青斑病料經(jīng)處理接種SSN1

3、細(xì)胞，設(shè)定不同溫度增值病毒。通過(guò)制備病理切片、觀察細(xì)胞病變(cytopathiceffects，CPE)、PCR擴(kuò)增VNNV部分核酸片段和電鏡觀察來(lái)確定分離物是否為VNNV。結(jié)果通過(guò)病理切片可以在病魚(yú)視網(wǎng)膜中看到大量空泡化現(xiàn)象，接種的SSN1細(xì)胞在25℃培養(yǎng)2-3天表現(xiàn)出CPE，PCR檢測(cè)結(jié)果為VNNV核酸陽(yáng)性，電鏡觀察細(xì)胞切片顯示有大量病毒粒子排列在感染的SSN1細(xì)胞質(zhì)中，負(fù)染可以看到其為直徑25-30nm的二十面體，無(wú)囊膜。綜上表明

4、所分離的為VNNV。隨后對(duì)其一些特性進(jìn)行研究。該病毒在SSN1細(xì)胞中25℃時(shí)滴度可以達(dá)到105.1/0.1mL，石斑魚(yú)吻端細(xì)胞系(grouperproboscis，GP)、鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞系(epithelimapopuasumcuprini，EPC)、肥頭鯉細(xì)胞系(pimephalespromelas，F(xiàn)HM)在28℃、25℃、20℃時(shí)對(duì)該病毒都沒(méi)有CPE，且PCR檢測(cè)VNNV核酸為陰性。病毒經(jīng)55℃30min、pH=3和pn=11各1

5、h處理后下降2個(gè)滴度，經(jīng)氯仿處理后滴度不變。以上說(shuō)明GP、EPC、FHM這些細(xì)胞對(duì)該病毒都不敏感；該病毒對(duì)熱(55℃30min)和酸堿(pH=3和pH=11)都比較敏感；對(duì)氯仿不敏感說(shuō)明病毒沒(méi)有囊膜，符合VNNV的形態(tài)特征。 此研究從VNNV培養(yǎng)溫度及SSN1細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境等方面為制定細(xì)胞分離培養(yǎng)VNNV規(guī)程提供了一定的數(shù)據(jù)依據(jù)，具有一定的診斷意義。另外這是在我國(guó)首次借助SSN1細(xì)胞報(bào)道了VNNV的理化特性，為養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境控制提供了