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文檔簡介
1、第一部分半胱氨酰白三烯受體拮抗劑孟魯司特和HAMI3379在體外培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元缺血性損傷中的抗氧化作用
目的:在大鼠皮層神經(jīng)元缺血性損傷模型中,探討兩種半胱氨酰白三烯受體(CysLT1R和CysLT2R)拮抗劑的抗氧化作用。
方法:以CysLT1R拮抗劑孟魯司特和CysLT2R拮抗劑HAMI3379預(yù)處理,對體外培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元進(jìn)行缺糖缺氧/恢復(fù)(OGD/R)或H2O2處理,觀察神經(jīng)元活化氧(ROS)產(chǎn)生、線粒
2、體膜電位以及神經(jīng)元存活率變化,以及兩種藥物在這些過程中的作用。同時,以RNA干擾抑制CysLT1R和CysLT2R表達(dá),觀察以上變化。
結(jié)果:OGD處理1h后,神經(jīng)元ROS產(chǎn)生增加,在恢復(fù)0.5 h時達(dá)高峰;0.01~1μM孟魯司特和HAMI3379能輕度但顯著地抑制OGD/R誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)生(P<0.05)。OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)元線粒體膜電位下降,0.01~1μM孟魯司特有輕度抑制作用(P<0.05),而HAMI3379無明顯
3、作用。外源性H2O2濃度和時間依賴性損傷神經(jīng)元,孟魯司特和HAMI3379在0.1~1μM濃度范圍內(nèi),能輕度但顯著地減輕H2O2誘導(dǎo)的損傷(P<0.05)。CysLT1R siRNA和CysLT2R shRNA對以上反應(yīng)均無顯著影響。
結(jié)論:孟魯司特和HAMI3379在神經(jīng)元缺血性損傷中,均有輕度抗氧化作用,且可能是不依賴受體的作用。
第二部分原代小膠質(zhì)細(xì)胞半胱氨酰白三烯受體表達(dá)的初步研究
目的:初步研究大
4、鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞半胱氨酰白三烯受體表達(dá)情況。
方法:取出生24h的SD新生鼠,從皮層組織分離、純化原代小膠質(zhì)細(xì)胞。通過免疫熒光染色方法,觀察原代小膠質(zhì)細(xì)胞半胱氨酰白三烯受體CysLT1、CysLT2受體以及GPR17的表達(dá)情況,確定是否存在共定位;并且,使用激動劑LPS、NMLTC4誘導(dǎo),觀察受體的表達(dá)變化。
結(jié)果:分離、純化并獲得原代小膠質(zhì)細(xì)胞,免疫熒光染色結(jié)果顯示,CysLT1、CysLT2受體和GPR17都有表
5、達(dá),它們之間存在明顯的共表達(dá)(即CysLT1R/CysLT2R、CysLT1R/GPR17和CysLT2R/GPR17)。LPS能刺激CysLT2受體發(fā)生內(nèi)移,并有一定的聚集;而CysLT2受體激動劑NMLTC4誘導(dǎo)的CysLT2受體也誘導(dǎo)內(nèi)移和聚集,但比LPS弱。
結(jié)論:原代小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)半胱氨酰白三烯受體CysLT1、CysLT2受體和GPR17,并存在明顯的共定位;炎癥誘導(dǎo)劑LPS能夠誘導(dǎo)CysLT2受體聚集和內(nèi)移,Cy
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