肉雞2個肌肉發(fā)育相關基因的多態(tài)性與功能研究.pdf

1、肌肉是動物生存和運動的重要組織，是人類重要的動物蛋白來源。在機體三種肌肉組織中，骨骼肌是在脊椎動物胚胎期由軸旁中胚層發(fā)育而來的一個復雜的組織，與骨骼鏈接、骨骼的活動和姿勢的保持等組織器官的多種功能相關。骨骼肌的形成是一個復雜的過程，在多基因的共同作用下，通過成肌細胞（肌肉前體細胞）的增殖和分化形成肌纖維?；诒緦嶒炇仪捌诘腉WAS結果，本論文研究了與肉雞肌肉發(fā)育相關的GJA1（縫隙連接蛋白1）和HDAC2（組蛋白脫乙酰酶2）基因的功能和

2、多態(tài)性。
　　試驗-1:本研究旨在研究功能基因HDAC2、GJA1與雞肌肉生長發(fā)育的關系。利用qRT-PCR技術，檢測了HDAC2基因mRNA在成肌細胞增殖分化期、胚胎期（4個時間點）和生長發(fā)育不同階段（5個時間點）的表達特性。HDAC2基因在4個胚齡（ED14，16，18和21）的胸肌和腿肌組織中表達呈顯著上升趨勢，該基因可能在胸肌和腿肌的成肌細胞增殖過程中發(fā)揮作用。體外細胞培養(yǎng)試驗發(fā)現(xiàn)，雞胚成肌細胞增殖的24h至48h期間，H

3、DAC2表達量顯著下降，肌肉發(fā)育特異性調控因子PAX7的表達量顯著升高。在0-72h內，細胞數(shù)呈持續(xù)上升趨勢。隨著成肌細胞誘導分化時間的延長，HDAC2和成肌分化標志性基因MYO D1的表達量均顯著上升。通過siRNA對GJA1基因進行功能分析。三種類型的siRNA（siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3）轉染成肌細胞24h后，GJA1表達量顯著下降，且siRNA-1對GJA1基因的抑制作用更為顯著;與對照組相比，siRNA-1

4、在轉染后24h、48h和72h，均顯著抑制成肌細胞的增殖和分化。綜上所述，HDAC2在成肌細胞發(fā)育過程中可能發(fā)揮抑制細胞增殖、促進細胞分化的功能。推測GJA1可以促進成肌細胞增殖和分化。
　　試驗-2:本研究以269只北京油雞(BJY)和176只科寶雞(CB)為素材，通過DNA測序和HRM(高分辨率熔解)的方法，對中外雞群GJA1和HDAC2基因進行了單核苷酸多態(tài)性(SNPs)篩選鑒定。在GJA1基因檢測到4個SNP，一個SNP位

5、于外顯子區(qū)域(C61223231T或C-1110C＞T)為同義突變;兩個SNP位于內含子區(qū)域(A61229799C或c.5460A＞C，T61229928A或c.5589T＞A);一個SNP位于啟動子（A61230599C或c.6260A＞C）的區(qū)域。在HDAC2基因發(fā)現(xiàn)兩個SNP均位于啟動子區(qū)域（T64230025C、A64229858C。GJA1基因的4個SNP均與雞生長性狀顯著相關，但是HDAC2基因的兩個SNP與生長性狀相關不顯