GSK-3β對卵巢癌細胞SKOV3化療耐藥性的影響及其機制研究.pdf

1、目的：卵巢癌的化療耐藥性是導致其臨床療效欠佳的重要因素之一，故明確其耐藥的分子機制，并且探尋有效逆轉卵巢癌耐藥的分子靶點以及研制耐藥逆轉劑成為目前卵巢癌研究的熱點和難點。糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase，GSK-3β）是近年來備受關注的腫瘤治療的分子靶點之一，因此本研究擬探討糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）對卵巢癌化療耐藥性的影響及其可能的機制，為其成為逆轉卵巢癌耐藥的分子靶點提供理論依據。

2、　　方法：首先運用氯化鋰(Lithium chloride，LiCl)增加失活性GSK-3β即p-GSK-3β(ser9)的水平，構建高表達p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細胞模型。隨后采用MTT法篩選合適的LiCl濃度和作用時間作為后續(xù)實驗LiCl的預處理，同樣用MTT法分別檢測順鉑和紫杉醇的半數抑制濃度(IC50)。接著使用流式細胞儀檢測LiCl處理前后SKOV3細胞內p-GSK-3β(ser9)的表達量。最后聯合免疫熒光技術觀

3、察LiCl預處理對卵巢癌細胞SKOV3內p-GSK-3β(ser9)定位情況的影響。
　　結果：依據MTT結果選擇LiCl20 mmol/L處理6h作為構建高表達p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細胞模型的條件。LiCl預處理后，24、48、72 h SKOV3細胞順鉑的半數抑制濃度從(20.37±0.56)、(7.79±0.72)、(2.8±0.32)μ g/ml增加至(27.57±0.81)(t=12.66, P=O.000

4、2)、(12.15±1.00)(t=6.13,P=0.0036)、(5.84±0.64)(t=7.36，P=0.0019)μ g/ml，差異均有統(tǒng)計學意義。LiCl20mmol/L預處理后，24、48、72h SKOV3細胞紫杉醇的半數抑制濃度從(10.11±0.87)、(1.07±0.17)、(0.03±0.01)μ g/ml增加至(12.54±0.88)(t=3.4, P=O.02)、(2.22±0.3)(t=5.78, P=O.0

5、045)、(0.093±0.03)(t=3.45，P=0.026)μ g/ml，差異均有統(tǒng)計學意義。流式的結果顯示，LiCl預處理后SKOV3細胞內p-GSK-3β(ser9)的平均熒光強度由661.67±37.63增加到1191.33±30.37，失活性磷酸化GSK-3β的水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義。免疫熒光的結果則提示，LiCl預處理后SKOV3細胞內p-GSK-3β(ser9)的水平有所上調，并且細胞核內的上調效應較為明顯。