MGF納米微球靜電紡絲材料對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、載體支架、種子細(xì)胞、生物活性因子已成為組織工程三大重要因素。本課題以 Yang等發(fā)現(xiàn)并命名的細(xì)胞對(duì)力刺激響應(yīng)的產(chǎn)物——力生長因子(mechano-growth factor,MGF)為生物活性因子,采用靜電紡絲技術(shù)(electrospinning)及相分離法制備了基于聚已內(nèi)酯(polycaprolactone,PCL)的含MGF的葡聚糖納米微球的纖維支架,采用從人的骨髓中提取的間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone mesenchymal

2、stem cells,hBMSC)為種子細(xì)胞,從hBMSC生物學(xué)行為的差異來研究葡聚糖微球?qū)GF生物活性的保護(hù)作用。本課題主要包括以下幾方面的內(nèi)容:
　?、?hBMSC原代分離培養(yǎng)及鑒定
　　利用密度梯度離心法,分離培養(yǎng)hBMSCs,觀察細(xì)胞形態(tài),采用CD34、CD73、CD14、CD90和CD105抗體熒光染色后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志,同時(shí)檢測細(xì)胞周期狀態(tài),確定細(xì)胞純度;使用脂肪分化、成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞多向分

3、化,證實(shí)細(xì)胞的多向分化潛能,為后續(xù)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供種子細(xì)胞支持。
　?、?MGF納米微球的制備和表征
　　采取相分離法制備空微球和含MGF的納米微球(MGF-Loaded dextran glassy nanoparticles,MGF-DGNs),并采用場發(fā)射掃描電鏡觀察微球形態(tài),為后續(xù)電紡纖維支架做準(zhǔn)備。
　?、垤o電紡絲材料的制備和表征
　　采用靜電紡絲技術(shù),制備四種纖維支架,分別是單純PCL溶液電紡(P);加

4、200μgMGF水溶液于PCL溶液中攪拌均勻后電紡(PM);PCL溶液中加100mg葡聚糖空微球攪拌均勻后電紡(PD);加100mg含了200μgMGF的葡聚糖微球到PCL溶液中攪拌均勻后電紡(PDM)。并通過場發(fā)射掃描電鏡(FESEM)、透射電鏡(TEM)、傅里葉紅外光譜(FTIR)、比表面積及孔隙度分析儀等表征手段檢測支架的表面形貌及理化性質(zhì)。
　?、躆GF對(duì)hBMSC生物學(xué)行為的影響
　　在P、PM、PD、PDM四種不