AR共調(diào)節(jié)因子CAMK2N1抑制前列腺癌生長的體外研究.pdf

1、目的:探索CAMK2N1對前列腺癌生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機制,并研究CAMK2N1與雄激素受體(androgenreceptor,AR)之間的作用關(guān)系。
　　方法:應(yīng)用流式細(xì)胞分選技術(shù)構(gòu)建DU145-Vector,DU145-shCAMK2N1,LNCaP-Vector和LNCaP-shCAMK2N1穩(wěn)定細(xì)胞株。MTT和細(xì)胞周期實驗研究CAMK2N1表達(dá)下調(diào)對LNCaP和DU145細(xì)胞增殖及周期的影響。Westernblot技術(shù)研

2、究不同組穩(wěn)定細(xì)胞株ErbB2,MEK,AKT,P-MEK,ERK1/2,P-AKT,P-ERK1/2,Bcl-2,Bax,p21及NF-κβ蛋白的表達(dá)。應(yīng)用qRT-PCR和Westernblot技術(shù),分別研究雄激素對LNCaP細(xì)胞CAMK2N1mRNA和蛋白表達(dá)的影響。熒光酶素報告基因?qū)嶒炘u估CAMK2N1對LNCaP細(xì)胞AR轉(zhuǎn)錄活性的作用。免疫熒光、免疫沉淀和ChIP分析進一步研究AR和CAMK2N1之間的相互作用。
　　結(jié)果:

3、CAMK2N1基因沉默可提高DU145和LNCaP細(xì)胞的增殖能力,減少G0/G1期細(xì)胞所占比例,增加S期細(xì)胞的比例。DU145和LNCaP細(xì)胞CAMK2N1表達(dá)下調(diào)可增加ErbB2,MEK,AKT,P-MEK,ERK1/2,P-AKT,P-ERK1/2,Bcl-2及NF-κβ蛋白表達(dá),降低Bax,p21蛋白表達(dá)。與對照組相比,雄激素R1881處理顯著降低CAMK2N1mRNA和蛋白的表達(dá)水平。雄激素R1881誘導(dǎo)雄激素反應(yīng)報告基因PSA

4、-Luc、MMTV-Luc及ARE4-Luc的活性表達(dá)。過表達(dá)CAMK2N1后R1881誘導(dǎo)的啟動子活性減少近50％。相反,下調(diào)CAMK2N1表達(dá)將PSA-Luc活性增加約1倍,MMTV-Luc活性增加近24倍。免疫熒光標(biāo)記和免疫共沉淀分別證實CAMK2N1和AR在胞核和胞質(zhì)內(nèi)的共定位及共沉淀。在雄激素作用下,CAMK2N1基因沉默可增強AR與PSA增強子結(jié)合力。
　　結(jié)論:CAMK2N1是PCa的一種抑制因子。CAMK2N1基因