一、帕比司他協(xié)同過表達hepaCAM抑制前列腺癌生長機制二、HepaCAM調(diào)控PI3K-Akt-AR-DDR通路促進前列腺癌細胞凋亡.pdf

1、本文研究了帕比司他協(xié)同過表達hepaCAM抑制前列腺癌生長機制及HepaCAM調(diào)控PI3K-Akt/AR/DDR通路促進前列腺癌細胞凋亡。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：
　　目的：研究帕比司他（Panobinostat）逆轉(zhuǎn)抑癌基因肝細胞粘附分子（hepaCAM）表達，協(xié)同hepaCAM抑制前列腺癌細胞生長。
　　方法：不同濃度帕比司他作用于體外培養(yǎng)的PC3和LNCap細胞，首先采用MTT法檢測帕比司他對細胞增殖

2、的影響，RT-PCR和Western Blot法檢測hepaCAM、組蛋白去乙?；福℉DACs）以及乙酰化組蛋白H3賴氨酸9（Ac-H3K9）的表達變化。進一步用不同因素處理細胞， MTT法檢測細胞增殖活性，流式細胞術(shù)檢測細胞周期改變，RT- PCR和Western Blot法檢測細胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinD1和增殖細胞核抗原（PCNA）的基因表達。
　　結(jié)果：帕比司他抑制PC3和LNCap細胞生長與作用濃度增加和時間呈正相關(guān)

3、， hepaCAM mRNA、蛋白以及細胞核中Ac-H3K9表達隨帕比司他濃度升高而增加，HDAC1、 HDAC3、 HDAC4 mRNA和蛋白的表達隨濃度升高而降低；單獨過表達hepaCAM腺病毒和單獨使用帕比司他組兩種細胞生長明顯受到抑制且隨作用時間延長抑制率增加，兩者聯(lián)用更為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與單獨hepaCAM腺病毒組和帕比司他組相比，兩者聯(lián)用 S期細胞比例明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且可進

4、一步下調(diào)cyclinD1、 PCNA mRNA和蛋白的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：帕比司他可通過抑制HDACs活性，加強PCa PC3和LNCap細胞組蛋白 H3 N-端的賴氨酸殘基乙酰化，逆轉(zhuǎn) hepaCAM表達；hepaCAM腺病毒和帕比司他聯(lián)用可協(xié)同抑制PC3和LNCap細胞生長，作用機制可能與下調(diào)cyclinD1和PCNA的表達有關(guān)。
　　第二部分：
　　目的：研究過表達hepaCAM對

5、前列腺癌細胞凋亡的影響及分子機制。
　　方法：過表達hepaCAM腺病毒感染前列腺癌細胞PC3（雄激素非依賴型）及LNCap（雄激素依賴型）細胞株后，Hoechst33258染色、流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡；Western Blot測 caspase家族信號分子Procaspase8、cleaved caspase3和cleaved caspase9表達以及DNA損傷標志物γ-H2AX和DNA損傷修復(fù)反應(yīng)（DNA damage res

6、ponse,DDR）標志物p-ATM蛋白表達；進一步分別運用AR通路和PI3K-Akt通路激活劑和抑制劑處理細胞后， Western Blot檢測 AR、PSA、p-Akt、Procaspase8、cleaved caspase3、cleaved caspase9、γ-H2AX和p-ATM等蛋白表達以及流式細胞術(shù)檢測各處理組細胞凋亡。
　　結(jié)果：⑴與空白組和空載組相比，感染hepaCAM腺病毒組加重前列腺癌細胞 DNA損傷，減弱