青霉TS67抗菌物質的制劑化研究.pdf

1、本研究擬將本實驗室自己分離的生防菌株TS67開發(fā)為一種高效、廣譜、廉價的生物殺菌劑，為此對青霉TS67的液體發(fā)酵工藝、防病促生效果及制劑化工藝進行了初步研究。 以玉蜀黍平臍蠕孢菌(Bipolaris maydis)和大豆尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)為指示菌株，驗證11株渤海海洋霉菌的抑菌活性。結果表明，菌株TS67對兩種病原菌均有很強的抑制作用，100μL發(fā)酵上清液對F.oxysporum和B.maydis

2、的抑菌圈直徑分別達到了20.3mm和13.6mm。采用正交試驗實驗方法，研究了青霉TS67菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基，結果表明蛋白胨、NaCl和葡萄糖各因素對青霉TS67抗生素產量的影響依次減弱。發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為葡萄糖1％、蛋白胨0.2％、NaC125g/l、吐溫-80 0.1％。單因素實驗證實菌株TS67的最佳發(fā)酵條件為28℃，170r/min，8％的接種量，接種時間45h，上液量75ml，起始pH值為6，發(fā)酵培養(yǎng)96h。同時發(fā)現(xiàn)降低

3、穩(wěn)定期搖床轉速能明顯增加抗菌物質的產量。在30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)TS67菌株，在8％接種量，40％上液量，1:0.9通氣量，28℃150r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)至pH4.8，所得發(fā)酵液對大豆根腐病效價為3029U/mg，發(fā)酵液對玉米小斑病效價為2735U/mg。30L發(fā)酵罐最佳發(fā)酵條件為轉速200r/min，通氣量1:0.9vvm。 采用盆栽試驗的方法，通過病情指數(shù)和防治效率等指標研究青霉TS67菌株的發(fā)酵液、發(fā)酵上清液和菌體對大

4、豆根腐病及玉米小斑病的影響。實驗結果的SPSS統(tǒng)計分析表明，青霉TS67的所有處理均能顯著(P<0.01)抑制大豆根腐病及玉米小斑病的發(fā)生。而且用青霉TS67進行大豆拌種能有效促進大豆幼苗生長。 采用60％-80％飽和度硫酸銨對青霉TS67發(fā)酵液進行鹽析，獲得抗菌物質粗制品，并以其為原藥，通過表面活性劑的篩選和配伍，確定了3種TS67微乳劑配方。 通過正交實驗獲得TS67最佳產孢培養(yǎng)基的配方為：蔗糖0.9499％，硝酸鈉