柑橘褐斑病菌毒素提取、產(chǎn)毒特性及對寄主防御酶的影響.pdf

1、柑橘褐斑病(Alternaria brown spot)是由鏈格孢菌(Alternaria alternata)引起的一種柑橘真菌病害。由于受該病原菌侵染的部位能產(chǎn)生褐色的壞死斑，故稱為褐斑病。該病原菌主要危害柑橘葉片、枝條和果實(shí)，引起落葉、落果，甚至導(dǎo)致植株死亡，嚴(yán)重影響柑橘的品質(zhì)與產(chǎn)量。目前主要通過農(nóng)藝和化學(xué)措施進(jìn)行防控。
　　我國在2010年首次正式報(bào)道該病害。2011年重慶萬州爆發(fā)該病害，經(jīng)鑒定病原菌為鏈格孢菌。已有大量關(guān)

2、于該病原菌的生物學(xué)特性及遺傳方面的研究，但幾乎無關(guān)于其病原菌產(chǎn)生毒素的研究。而大量研究表明，病原真菌產(chǎn)生的毒素是主要致病因子，且毒素可以作為選擇劑篩選抗性品種。因此有必要對毒素的產(chǎn)生條件、提取方法及其致病機(jī)理進(jìn)行探討。本文對柑橘褐斑病菌毒素的提取方法、毒性鑒定、產(chǎn)毒條件、不同柑橘品種用毒素處理后防御酶活性變化進(jìn)行了較系統(tǒng)的分析和研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)用丙酮、甲醇、乙酸乙酯、氯仿、四氯化碳等5種極性不同的有機(jī)溶劑萃取培

3、養(yǎng)濾液，提取粗毒素。結(jié)果表明，在甲醇的有機(jī)相中提取得到的粗毒素致病力最強(qiáng)，說明甲醇的萃取效果較好，且毒素的極性較大，為5.1～5.4，是小分子物質(zhì)。
　　(2)通過對本實(shí)驗(yàn)室保存的28個(gè)鏈格孢菌菌株進(jìn)行致病力和產(chǎn)毒量比較，篩選出兩個(gè)產(chǎn)毒量較高的菌株:SP-36（分離自西班牙克里曼丁桔）和CJBHF-2（分離自重慶萬州紅橘）。對SP-36和CJBHF-2菌株進(jìn)行產(chǎn)毒特性研究，測定影響毒素產(chǎn)量的培養(yǎng)因子。結(jié)果表明:在Richard's

4、等6種培養(yǎng)基上，兩個(gè)菌株在查彼克培養(yǎng)基上均不產(chǎn)毒，CJBHJF-2菌株在PSK培養(yǎng)基上不產(chǎn)毒，且兩個(gè)菌株在改良Richard's培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量較高;供試菌株在10℃～35℃范圍內(nèi)均能產(chǎn)毒，最適溫度為28℃;供試菌株在pH值為2的培養(yǎng)基中不產(chǎn)毒，在pH3～7的范圍內(nèi)均能產(chǎn)毒，SP-36和CJBHJF-2產(chǎn)毒最適pH值分別為pH4和pH5;供試菌株在培養(yǎng)5～30d范圍內(nèi)產(chǎn)毒量呈現(xiàn)先上升，后下降的趨勢，在培養(yǎng)第10d時(shí)產(chǎn)毒量最高，30d時(shí)產(chǎn)毒

5、量最低;供試菌株在連續(xù)光照、振蕩條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)毒量較高。因此，柑橘褐斑病菌最適產(chǎn)毒培養(yǎng)基為改良Richard's培養(yǎng)基，產(chǎn)毒的最適pH值為4～5;最適培養(yǎng)條件為28℃，振蕩、連續(xù)光照培養(yǎng)10d。
　　(3)在毒素處理不同抗性柑橘品種后的3～72 h時(shí)間內(nèi)，CAT、POD、SOD、PPO、PAL等防御酶的變化有所不同;抗病品種葉片中防御酶活性比感病品種更早更快的發(fā)生變化。抗病品種CAT活性在呈現(xiàn)緩慢上升，緩慢下降，后又急劇上升，急劇

6、下降的趨勢，且24 h達(dá)最大值;而感病和中抗品種在整個(gè)病程內(nèi)CAT活性均無大幅度的變化。抗病品種POD活性峰出現(xiàn)在6h，而中抗和感病品種的活性峰分別出現(xiàn)在12h和24 h。不同抗性柑橘品種經(jīng)柑橘褐斑病菌毒素處理后SOD活性呈現(xiàn)先緩慢上升，緩慢下降，后又急劇上升，急劇下降的趨勢，抗病品種SOD活性在3h達(dá)最大值，感病和中抗品種活性峰在24 h?？共∑贩N和中抗品種在病程的絕大多數(shù)時(shí)間內(nèi)PPO活性都比感病品種高，PPO活性在6～12h內(nèi)急劇增