抗磷脂抗體對(duì)Th細(xì)胞亞型影響的研究.pdf

1、本研究分為三部分。
　　第一部分 不同濃度抗磷脂抗體對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th細(xì)胞亞型表達(dá)的調(diào)節(jié)
　　目的:探討不同濃度aPL抗體對(duì)外周血中Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)作用。
　　方法:分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞，與不同濃度的抗磷脂抗體共同培養(yǎng)孵育48小時(shí)后，檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th1、Th2、Th17、Treg四種亞型的表達(dá)。我們采用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)直接從數(shù)量上檢測(cè)抗磷脂抗體干預(yù)后的Th1、Th2、Th

2、17、Treg四種亞型細(xì)胞分化情況，并通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從Th細(xì)胞分化的上游過程中探討抗磷脂抗體干預(yù)后的Th1、Th2、Th17、Treg四種亞型細(xì)胞分化狀態(tài)。
　　結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)aPL干預(yù)后Th1細(xì)胞及其T-bet mRNA表達(dá)均出現(xiàn)下調(diào);Th2細(xì)胞及其GATA3 mRNA表達(dá)上調(diào)，Th1/Th2比值下降，平衡向Th2偏移;Th17細(xì)胞及其ROR-γ t mRNA表達(dá)上調(diào)，Treg細(xì)胞及其Foxp3mRNA

3、表達(dá)下調(diào)，Th17/Treg失衡。且本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Th細(xì)胞亞型變化與aPL抗體濃度相關(guān)，高濃度的aPL抗體導(dǎo)致Th細(xì)胞亞型分化的紊亂。
　　結(jié)論:
　　1.aPL導(dǎo)致PBMCs中Th1、Th2、 Th17、Treg細(xì)胞表達(dá)發(fā)生改變，導(dǎo)致Th1/Th2失衡，Th17/Treg失衡，導(dǎo)致免疫紊亂，可能參與aPL介導(dǎo)的組織損傷。
　　2.Th細(xì)胞亞型變化與aPL濃度存在劑量關(guān)系。
　　第二部分 探討抗磷脂抗體對(duì)外周血單個(gè)核

4、細(xì)胞表達(dá)協(xié)同刺激分子PD-L1的影響
　　目的:探討不同濃度抗磷脂抗體對(duì)協(xié)同刺激分子PD-L1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用以及PD-L1在aPL導(dǎo)致Th細(xì)胞亞型分化紊亂中的作用。
　　方法:分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞，與不同濃度的抗磷脂抗體共同培養(yǎng)孵育48小時(shí)后，檢測(cè)采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中PD-L1蛋白表達(dá)強(qiáng)度，并通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)PD-L1 mRNA轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。同時(shí)分析PD-L1表達(dá)與Th細(xì)胞分化的相關(guān)情況。觀察

5、并比較經(jīng)PD-L1-Ig預(yù)處理后，致病濃度的aPL抗體對(duì)Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細(xì)胞分化的影響。
　　結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)aPL干預(yù)后PD-L1蛋白及mRNA表達(dá)均呈上調(diào)趨勢(shì)，各組間表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=9.391，p=0.000;F=15.344，p=0.000)，且上調(diào)與抗體濃度顯著正相關(guān)(r=0.713，p=0.000;r=0.756，p=0.000)。PD-L1蛋白表達(dá)與Th1細(xì)胞，Treg細(xì)胞以及Th1

6、/Th2比例負(fù)相關(guān)，而與Th2細(xì)胞及Th17細(xì)胞表達(dá)無相關(guān)性。而PD-L1 mRNA表達(dá)與T-bet mRNA，F(xiàn)oxp3 mRNA以及T-bet/ GATA3比例顯著負(fù)相關(guān)，與GATA3 mRNA及ROR-γ t mRNA表達(dá)顯著正相關(guān)。但是給予PD-L1-Ig阻斷協(xié)同刺激信號(hào)通路后，研究發(fā)現(xiàn)高濃度的aPL組與阻斷抗體組Th細(xì)胞亞型變化無顯著差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.aPL可導(dǎo)致PD-L1表達(dá)上調(diào)，且與抗

7、體濃度正相關(guān)。協(xié)同刺激分子PD-L1可能在APS發(fā)病中發(fā)揮作用。
　　2.協(xié)同刺激分子PD-L1可能在aPL導(dǎo)致的Th細(xì)胞分化紊亂中發(fā)揮作用。
　　3.抑制PD-L1協(xié)同刺激信號(hào)通路對(duì)Th亞型分化無明顯影響。
　　第三部分卡 介菌多糖核酸對(duì)aPL干預(yù)后的PBMCs中Ih細(xì)胞亞型的影響
　　目的:探討卡介菌多糖核酸治療APS的可能機(jī)制
　　方法:分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞，與致病濃度的抗磷脂抗體、治療濃度的卡

8、介菌多糖核酸溶液共同培養(yǎng)孵育48小時(shí)后，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細(xì)胞表達(dá)情況，并通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細(xì)胞mRNA表達(dá)的變化情況。
　　結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)卡介菌多糖核酸溶液干預(yù)后Th1細(xì)胞及其T-bet mRNA表達(dá)均出現(xiàn)顯著上調(diào)(p=0.000; p=0.000);Th2細(xì)胞及其GATA3 mRNA表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0