慢性HCV感染與LA-DRB1-1301，1302等位基因的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的；HCV感染的顯著特征是慢性化率很高。一些肝外組織可能成為HCV的儲(chǔ)存場(chǎng)所，不利于徹底清除病毒。進(jìn)一步探討肝外細(xì)胞尤其外周單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的HCV感染對(duì)丙型肝炎慢性化有重要意義?，F(xiàn)代研究認(rèn)為慢性丙型肝炎肝臟組織損傷主要是由于機(jī)體免疫應(yīng)答所致，宿主免疫應(yīng)答的高低決定著丙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展。由于人類白細(xì)胞抗原(humanleucocyteantigen，HLA)復(fù)合體可以調(diào)控機(jī)體免疫應(yīng)答，所以HLA復(fù)合體與HCV感染之間的關(guān)

2、系日益受到重視。HLA-Ⅰ類和Ⅱ類抗原分別是CD8和CD4分子的配體，可穩(wěn)定和促進(jìn)免疫細(xì)胞間相互結(jié)合、增強(qiáng)免疫應(yīng)答的啟動(dòng)或效應(yīng)功能，與抗HCV免疫反應(yīng)有著密切的關(guān)系。某些特殊的HLA基因型可能影響著HCV感染后機(jī)體免疫的強(qiáng)弱，從而影響丙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展。新近研究表明HLA-Ⅱ抗原HLA-DRB1*1301,1302在乙型肝炎病毒清除中發(fā)揮重要作用，探討HLA-DRB1*1301,1302基因?qū)β訦CV感染及其慢性化的影響有重要意義。

3、 方法；根據(jù)GeneBank提供的序列，oligo軟件PRIMER分析進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，采用套式PCR檢測(cè)血清及外周單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中HCVRNA，產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，用DNAMarker為分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小和擴(kuò)增特異性。采用酚-氯仿法從血液中提取基因組DNA,利用計(jì)算機(jī)軟件自行設(shè)計(jì)HLA-DRB1*1301，1302特異性引物，根據(jù)人工合成的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)慢性丙型肝炎患者進(jìn)行HLA-DRB1*

4、1301，1302的檢測(cè)，，然后提純進(jìn)行測(cè)序分析。采用SSPS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果；61例慢性丙型肝炎患者中血清HCVRNA陽性41(67.2％)例，PBMC-HCVRNA陽性33(54.0％)例，二者有一定相關(guān)性(χ2=18.32P=0.000＜0.05)；但其中3例血清陰性患者PBMC-HCVRNA陽性。41例血清HCVRNA陽性患者中4(9.8％)例HLA-DRB1*1301，1302基因陽性，20例血清HC

5、VRNA陰性患者中7(35.0％)例HLA-DRB1*1301，1302基因陽性，采用fisher精確概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029，OR=0.22)。33例PBMC-HCVRNA陽性患者中3(9.0％)例HLA-DRB1*1301，1302基因陽性，28例PBMC-HCVRNA陰性患者中8(28.6％)例HLA-DRB1*1301，1302基因陽性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.889,P=0.049，OR=0.25)