HLA-DRB等位基因與蘇皖籍漢族人群甲真菌病的相關(guān)性初步研究.pdf

1、甲真菌病是皮膚科的常見病和多發(fā)病，致病菌包括皮膚癬菌、酵母菌（主要是念珠菌）和非皮膚癬菌的霉菌等。據(jù)流行病學(xué)研究顯示，甲真菌病的發(fā)病率占自然人群的2％～11％，皮膚真菌感染的30％和所有甲病的50％。甲真菌病治療困難，療程長(zhǎng)，易于復(fù)發(fā)和再次感染，一直是皮膚科治療上的棘手問題。甲真菌病不僅僅是變色、變形、變厚，而且還影響甲的功能和指/趾端功能。甲真菌病長(zhǎng)期不愈，在人體也形成了一個(gè)潛在的真菌傳染源，隨著病甲的到處搔抓而使身體其他部位發(fā)生新的

2、感染灶，而且通過接觸傳播，也可引起其他人的感染，繼發(fā)細(xì)菌感染可發(fā)生丹毒，蜂窩織炎，膿血癥等全身癥狀嚴(yán)重的疾病。
　　 隨著現(xiàn)代化社會(huì)的發(fā)展，人們生活水平的提高及社會(huì)交往活動(dòng)的日益廣泛，甲真菌病對(duì)患者生活質(zhì)量和心理健康的影響也越來越大。大量的調(diào)查研究表明，甲真菌病對(duì)患者生理功能及日常生活、精神情緒及心理狀態(tài)、社會(huì)活動(dòng)和家庭活動(dòng)等方面均有不同程度的影響;病程越長(zhǎng)、病甲累及范圍越廣、病甲數(shù)越多，治療效果越差，患者生活質(zhì)量受影響的程度也

3、越大。因此積極明確甲真菌病的病因，對(duì)早期防治甲真菌病有重要的現(xiàn)實(shí)意義。在臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)原發(fā)感染患者的直系親屬中有甲真菌病，雖然在同一家庭中可能存在交叉感染，但有研究表明夫婦雙方中一方患甲真菌病，而另一方受感染的機(jī)會(huì)很小，而父母有感染者，子女的感染率明顯增高。而且不同的原發(fā)感染者其病程的長(zhǎng)短，以及病甲的臨床表現(xiàn)，對(duì)藥物治療的反應(yīng)，均有很大的不同，這些可能與某些基因的易感性有關(guān)。
　　 國外有少量的研究表明HLA-DRB

4、等位基因與紅色毛癬菌感染的甲真菌病相關(guān)，Asz-Sigall D等和Garcia-Romero MT等的研究結(jié)果分別表明HLA-DR6(HLA-DRB1*06)與HLA-DR8(HLA-DRB1*08)可能是混血墨西哥人紅色毛癬菌甲真菌病的拮抗基因和易感基因;Zaitz C等的研究結(jié)果表明HLA-DR53(HLA-DRB4)是巴西北歐猶太人紅色毛癬菌甲真菌病的拮抗基因。
　　 HLA-DRB基因是HLA-Ⅱ類基因中的一種，HLA

5、-Ⅱ類基因位于人類第6號(hào)染色體HLA復(fù)合體著絲點(diǎn)的一端，包括數(shù)十個(gè)基因座位，經(jīng)典的Ⅱ類基因一般指HLA-DR、HLA-DP和HLA-DQ，大約占1.0Mkb。DR亞區(qū)包括1個(gè)DRA基因及9個(gè)DRB基因，其中DRB1、DRB3、DRB4、DRB5是功能基因，DRB2和DRB6～9是假基因。DRB1恒表達(dá)，而DRB3、DRB4、DRB5座位則存在于不同的單倍型上，其位點(diǎn)的表達(dá)主要決定于與之連鎖的DRB1等位基因的型別。已知HLA是人體多態(tài)性

6、最豐富的基因系統(tǒng)，截至2006年7月，已確定的HLA復(fù)合體等位基因總數(shù)達(dá)到2641個(gè)，其中HLA-DRB1等位基因多達(dá)527個(gè)。HLA-DRB等位基因的多態(tài)性體現(xiàn)在不同人種、民族、地域人群中等位基因的分布各不相同。
　　 由于國外的研究均局限于紅色毛癬菌甲真菌病，表明HLA-DRB等位基因與紅色毛癬菌甲真菌病相關(guān)，但有明顯的地域和人種差異，且缺乏其他菌種感染的資料，而國內(nèi)尚無相關(guān)研究。所以我們收集本院皮膚科門診就診的無系統(tǒng)疾忠的

7、甲真菌病患者，并采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(PCR-SSP)方法，尋找蘇皖籍漢族人群甲真菌病患者的易感或拮抗基因，以期從基因水平揭示甲真菌病的致病機(jī)制，為預(yù)防及治療甲真菌病感染提供新的研究思路及理論基礎(chǔ)。
　　 1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院127例無系統(tǒng)疾患者甲真菌病的調(diào)查分析
　　 1.1 目的：了解南京軍區(qū)南京總醫(yī)院皮膚科門診就診的無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者的一般情況、臨床類型、致病真菌菌種構(gòu)成及其分布。
　

8、　 1.2 對(duì)象和方法：收集2011年11月至2012年5月來我院皮膚科門診（非軍人門診）就診的127例無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者的一般信息，采集病甲標(biāo)本，同時(shí)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行真菌學(xué)檢查、培養(yǎng)及鑒定。
　　 1.3 結(jié)果：
　　 1)患者的一般情況共收集患者127例，其中男60例，女67例，男∶女為1∶1.12。年齡3歲～83歲，平均年齡(38.94±15.51)歲。職業(yè)以辦公室人員54例(42.52％)最為常見。

9、　　 2)家庭成員感染情況127例患者中有54例(42.52％)患者的一級(jí)親屬同時(shí)患有甲真菌病。96例已婚患者中，僅有15例患者的(15.63％)伴侶同時(shí)有甲真菌病。x2=18.507，P=0.000＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3)病甲情況
　　 60例男性患者中，指甲感染4(6.67％)例，趾甲感染35(58.33％)例，指趾甲感染21(35.00％)例;67例女性患者中，指甲感染6(8.96％)例，趾甲感

10、染46(68.66％)例，指趾甲感染15(22.39％)例。趾甲感染共117例，病程從1周～50年，平均(8.33±0.91)年，指甲感染共46例，病程從1月～50年，平均(7.23±1.40)年。
　　 4)病甲臨床表現(xiàn)在46例病變指甲和117例病變趾甲中，各種臨床表現(xiàn)分別為指甲:近端甲下型0例(0.00％)、白色淺表型11例(23.91％)、全甲毀損型9例(19.57％)、遠(yuǎn)端側(cè)位甲下型26例(56.52％);趾甲:近端甲下

11、型4例(3.42％)、白色淺表型14例(11.97％)、全甲毀損型15例(12.82％)、遠(yuǎn)端側(cè)位甲下型84例(71.97％)。合計(jì)病甲近端甲下型4例(2.45％)、白色淺表型25例(15.34％)、全甲毀損型24例(14.72％)、遠(yuǎn)端側(cè)位甲下型110例(67.48％)。
　　 5)培養(yǎng)陽性率46份指甲標(biāo)本培養(yǎng)陽性為35例(76.09％);117例趾甲標(biāo)本培養(yǎng)陽性為85例(72.65％)。指甲，趾甲培養(yǎng)陽性率對(duì)比卡方檢驗(yàn)x2=

12、0.201，P=0.654＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6)培養(yǎng)結(jié)果
　　 共收集指/趾甲標(biāo)本46例和117例，其中真菌培養(yǎng)陽性有120(73.62％)例，在培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中，皮膚癬菌為101(84.17％)例，其中紅色毛癬菌89(74.17％)例，為主要的感染菌種，紅色毛癬菌混合感染13(10.83％)例，酵母5(4.17％)例，非皮膚癬菌的霉菌1(0.83％)例。
　　 1.4 結(jié)論：
　　

13、1)本院皮膚科門診就診的無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者男女比例1∶1.12，職業(yè)以辦公室人員(42.52％)最為多見，單純指甲或趾甲感染者的年齡以21～30歲最常見，而指趾甲同時(shí)感染者的年齡以41～50歲最為常見。
　　 2)在無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者中，宿主的遺傳易感性占有顯著意義。
　　 3)在無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者中，病甲的臨床表現(xiàn)以遠(yuǎn)端側(cè)位甲下型最為多見，以近端甲下型最為少見。
　　 4)本次研究

14、培養(yǎng)陽性率為73.62％，指/趾甲培養(yǎng)陽性率無顯著差異。
　　 5)本院就診的無伴發(fā)系統(tǒng)疾患的甲真菌病患者中主要致病菌為皮膚癬菌，雖然單純酵母和非皮膚癬菌的霉菌感染比較少，但混合感染有一定比例，所以在臨床治療中，對(duì)于此類患者，尤其是久治不愈者，真菌學(xué)檢查的意義更顯重要，必要時(shí)選擇兼顧皮膚癬菌、酵母菌、霉菌的廣譜抗真菌藥。
　　 2.HLA-DRB等位基因與蘇皖籍漢族人群甲真菌病的相關(guān)性初步研究
　　 2.1 目的

15、：探討HLA-DRB等位基因與蘇皖籍漢族人群甲真菌病的相關(guān)性。
　　 2.2 方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(PCR-SSP)方法對(duì)48例紅色毛癬菌甲真菌病患者、14例須癬毛癬菌甲真菌病患者和48例健康對(duì)照者進(jìn)行HLA-DRB等位基因分型。根據(jù)每一等位基因出現(xiàn)的次數(shù)計(jì)算該等位基因的陽性數(shù)，用基因頻率估算式:等位基因頻率=等位基因數(shù)/等位基因總數(shù)（例數(shù)×2）計(jì)算各等位基因頻率。采用x2檢驗(yàn)對(duì)甲真菌病患者組與對(duì)照組的HLA-

16、DRB等位基因逐一進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，應(yīng)用SPSS for windows13.0版軟件包處理數(shù)據(jù)，以P＜0.05為顯著性差異判斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)計(jì)算比值比（Odds Ratio，OR）及其95％可信區(qū)間(Confidence Interval, CI)。
　　 2.3 結(jié)果：
　　 1)一般情況
　　 紅色毛癬菌甲真菌病患者48例，男24例，女24例，年齡17～78歲，平均年齡(35.56±14.71)歲;須癬毛癬菌甲真菌

17、病患者14例，男10例，女4例，年齡22～42歲，平均年齡(32.29±14.00)歲;對(duì)照組按照性別年齡與紅色毛癬菌組一一配對(duì)（年齡之間差距≤2歲）共48例，男24例，女24例，年齡17～76歲，平均年齡(35.60±14.36)歲。
　　 2)紅色毛癬菌甲真菌病組與健康對(duì)照組共檢出DRB1等位基因13個(gè)，包括:DRB1*01、*03、*04、*07、*08、*09、*10、*11、*12、*13、*14、*15、*16;須癬

18、毛癬菌甲真菌病組共檢出DRB1等位基因10個(gè)，包括DRB1*01、*03、*04、*07、*09、*11、*12、*13、*14、*16，未檢出DRB1*08、*10、*15。
　　 3) H LA-DRB1各等位基因在紅色毛癬菌甲真菌病組和健康對(duì)照組的比較P值均≥0.05。
　　 4)須癬毛癬菌甲真菌病患者組中HLA-DRB1*14等位基因陽性數(shù)為5，基因頻率為17.86％，健康對(duì)照組中HLA-DRB1*14等位基因陽

19、性數(shù)為3，基因頻率為3.13％，兩者基因頻率相比較，P=0.005＜0.05。HLA-DRB1*15在須癬毛癬菌甲真菌病患者組與健康對(duì)照組間的陽性頻率數(shù)分別為0和16，其基因頻率分別為0.00％和16.67％，兩者基因頻率相比較，P=0.021＜0.05。
　　 5) HLA-DRB3、DRB4、DRB5各等位基因頻率在紅色毛癬菌甲真菌病患者組與健康對(duì)照組間的比較，P值均≥0.05。
　　 6) HLA-DRB3、DRB

20、4、DRB5各等位基因頻率在須癬毛癬菌甲真菌病患者組與健康對(duì)照組間的比較，P值均≥0.05。
　　 2.4 結(jié)論：
　　 1) HLA-DRB1等位基因可能與蘇皖漢族人群甲的紅色毛癬菌感染無明顯相關(guān);
　　 2) HLA-DRB1*14可能是甲須癬毛癬菌感染的易感基因，而HLA-DRB1*15可能是甲須癬毛癬菌感染的拮抗基因;
　　 3) HLA-DRB3、DRB4、DRB5等位基因可能與蘇皖漢族人群甲的