NHL石蠟包埋組織免疫球蛋白基因重排PCR檢測條件的優(yōu)化.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文NHL石蠟包埋組織免疫球蛋白基因重排PCR檢測條件的優(yōu)化姓名：齊宗利申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：趙彤20030616蘭二蘭墮奎蘭一——三i!!翌4用8對(Ig7對和TCRvl對)基因重排引物，對144側(cè)(B淋巴瘤113例、T淋巴瘤24例、淋巴結(jié)反應(yīng)性增生7例)石蠟組織的基因重排進(jìn)行了檢測。三、結(jié)果1①通過比較15對引物，設(shè)計出4對新的Ig基因重排引物(P2、P2B、PK和PX)。②Prime

2、rPremier軟件結(jié)果認(rèn)為結(jié)構(gòu)較為合理。2①優(yōu)化篩選出8對(197對和TCRl對)引物。②用IgHFR3區(qū)基因重排引物測定DG75細(xì)胞基因重排，可擴增出3條清晰條帶，經(jīng)測序證實，第一條帶為目的帶，其它兩條均與免疫球蛋白序列有關(guān)；③已經(jīng)向GeneBank遞交了5個基因序列，最早遞交的P3SFA(V26OL4114bD)已經(jīng)公布，其它序列正在處理之中。3①從模板OD260／OD2蜘比值和穩(wěn)定程度上看，試劑盒法提取的DNA質(zhì)量要略優(yōu)于酚抽提

3、法和消化法；②從用PCR擴增看家globin基因片段的結(jié)果來看，這幾種方法差別不大。4①在49例B細(xì)胞淋巴瘤石蠟組織中，引物對Pl(FR3區(qū)引物)、P2A(FR2區(qū)引物)、Ple(FRl區(qū)引物)的檢出率分別為714％、612％和367％，Plc檢出率明顯低于Pl和P2A。②FR3區(qū)的引物對(Pl、P2、P3)對113例B細(xì)胞淋巴瘤的陽性檢出率分別為717％、823％、761％，三者之間檢出率無統(tǒng)計學(xué)差異，其中，我們自己設(shè)計的引物對P2檢

4、出率最高。③Ig輕鏈的引物(PrPE)在39例B細(xì)胞淋巴瘤的檢出率為718％，④經(jīng)測定結(jié)果的分析、組合和比較，優(yōu)選出一對最佳引物對(PIqP2)，使B細(xì)胞淋巴瘤石蠟組織重排的檢出率由823％提高到929％。四、結(jié)論本研究設(shè)從引物分析入手，設(shè)計出4對用于免疫球蛋白基因重排的引物(重鏈為P2和P2B，輕鏈為P1c和臥)。通過淋巴瘤細(xì)胞和石蠟組織基因重排的檢測，犖導(dǎo)出如下有意義的結(jié)論：1石蠟組織基因重排檢測中，IgH不同框架區(qū)的引物檢出率明顯