溶血磷脂酸抗缺氧無血清誘導的大鼠骨髓間充質干細胞凋亡及其信號轉導機制研究.pdf

1、骨髓間充質干細胞(BMSCs)是具有多向分化潛能的成體干細胞，在體外可以分化成為軟骨細胞，脂肪細胞，骨細胞等，它們對造血干細胞起支撐作用。BMSCs還可以表達內皮細胞，平滑肌細胞，心肌細胞，骨骼肌細胞等特有的表面標志物。再加上BMSCs容易獲取、沒有免疫原性、無倫理學問題等優(yōu)點，目前已經(jīng)成為治療缺血性心臟病的種子細胞之一。大量研究報道BMSCs移植到缺血心肌中有修復梗死心肌的潛能，但是由于移植入梗死心臟的BMSCs存活率很低，嚴重影響了

2、細胞的修復功能。我課題組前期研究發(fā)現(xiàn)BMSCs在缺氧無血清環(huán)境中發(fā)生凋亡現(xiàn)象。溶血磷脂酸(LPA)是一種結構簡單的水溶性磷脂信使，主要通過5種G蛋白耦聯(lián)受體亞型發(fā)揮其廣泛的生物學功能，不僅可以促進細胞骨架重排，還對細胞的生長、增殖、分化及細胞的信息傳遞產(chǎn)生多種影響，在心血管系統(tǒng)也有重要的作用。 本文旨在研究以體外缺氧無血清條件模擬心肌缺血的微環(huán)境中，LPA對骨髓間充質干細胞(BMSCs)的抗凋亡作用及其作用機制。實驗分為5組，第

3、一組為對照組，正常培養(yǎng)；第二組為模型組，缺氧無血清聯(lián)合處理6h；第三組為LPA1h組，先用25μmol/L LPA預處理1h，然后撤除LPA再進行缺氧無血清處理6h；第四組為LPA6h組，無預處理過程，加入25μmol/LLPA同時進行缺氧無血清處理6h；第五組為LPA1+6h組，先用25μmol/L LPA預處理1h，然后在保留LPA情況下進行缺氧無血清處理6h。應用Hoechst33342染色和膜聯(lián)蛋白V/PI雙染流式細胞術觀察細胞

4、凋亡，并利用Western印跡方法檢測ERK1/2和Akt的磷酸化水平變化。研究結果表明缺氧無血清條件引起明顯的BMSCs凋亡細胞凋亡率為24.2±3.12，LPA處理6h和1+6h組細胞凋亡率較凋亡模型組顯著降低(P＜0.05)，細胞凋亡率分別為12.86±3.93、12.57±0.94。而1h組細胞凋亡率與缺氧無血清組無顯著性差異，細胞凋亡率為23.17±5.15。LPA處理組(1h，6h，1+6h組)ERK1/2磷酸化水平較缺氧無

5、血清組降低，Akt磷酸化水平較缺氧無血清組增高。在缺氧無血清環(huán)境中，LPA有利于增強BMSCs的抗凋亡能力。而且，本實驗提示必須在持續(xù)存在的條件下，LPA才能維持促進細胞存活的信號通路的開放狀態(tài)，發(fā)揮抗缺氧無血清誘導的凋亡作用。根據(jù)我們的實驗結果，LPA 6h和LPA 1+6h組細胞凋亡率無顯著性差異，說明LPA對BMSCs進行預處理效果不是很明顯，提示在進行干細胞移植時不需用LPA進行預處理便可在BMSCs注入心肌的同時注射LPA，改