泰山四葉參多糖分離純化、理化特性及生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的:
　　 探討泰山四葉參多糖分離純化的方法;探討泰山四葉參總多糖及均一組分的理化特性;觀察泰山四葉參總多糖(PCL)對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病模型小鼠血糖和抗氧化能力的影響;觀察泰山四葉參總多糖的抗疲勞作用;探討泰山四葉參多糖主要組分的體外抗氧化活性及對小鼠脾臟淋巴細胞增殖的影響。
　　 方法:
　　 ①以泰山四葉參為材料，經(jīng)熱水提取、乙醇沉淀得泰山四葉參總多糖，通過二乙氨基乙基纖維素-52柱分離純化;采用Sep

2、hadexG-100凝膠層析，紫外光譜(200～600nm)掃描鑒定多糖主要組分的純度;多角度激光光散射儀與體積排阻色譜法聯(lián)用(MALLS-SEC)測泰山四葉參多糖組分的相對分子質(zhì)量(Mr)及其分布。②采用物理和化學(xué)方法研究泰山四葉參多糖總多糖及均一組分的理化性質(zhì);GC分析單糖的組成和摩爾比，咔唑-硫酸法測定糖醛酸的含量，并進行紅外光譜掃描。③采用四氧嘧啶腹腔注射法，建立糖尿病小鼠模型，將小鼠分成5組:正常對照組、模型組、陽性對照組(鹽

3、酸二甲雙胍，200mg·kg-1)、PCL低劑量組(400mg·kg-1)、高劑量組(800mg·kg-1)，連續(xù)灌胃14d后，測定各組血糖、胸腺和脾臟指數(shù)，檢測血清和肝臟中的超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。將小鼠分為PCL低、中、高3個劑量組和正常對照組，分別灌胃200、400、800mg/kgPCL和0.9％生理鹽水，21d后記錄小白鼠負重游泳時間，采血分離血清及取組織樣，試劑盒測定血尿素氮(BUN)含量、血清乳

4、酸以及肝糖元含量等與疲勞相關(guān)的生化指標。羥自由基(·OH)由Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生，超氧陰離子(O2-·)由鄰苯三酚自氧化法產(chǎn)生，硫代巴比妥酸法測定肝勻漿MDA相對含量反映PCL對脂質(zhì)過氧化的影響，并觀察泰山四葉參主要組分對H2O2誘導(dǎo)紅細胞溶血的影響。在體外化學(xué)模擬條件下測定泰山四葉參多糖主要組分的總還原能力;分離正常小鼠脾臟淋巴細胞并進行體外培養(yǎng)，在細胞培養(yǎng)體系中分別加入終濃度為20、40、80、160mg·mL-1泰山四葉參多糖

5、主要組分及其配合脂多糖(LPS)(10mg·L-1)或終濃度為10、20、40、80mg·mL-1泰山四葉參多糖主要組分及其配合刀豆素(ConA)(5mg·L-1)作用48h，用MTT法測定細胞的增殖程度。
　　 結(jié)果:
　　 ①經(jīng)水提醇沉法得到四葉參總多糖(PCL)，收率為11.3％，經(jīng)分離純化得多糖主要組分PCL-1、PCL-2、PCL-3、PCL-4，經(jīng)凝膠層析檢測顯示單一對稱峰;200～600nm掃描未見蛋白質(zhì)、

6、核酸的特征吸收峰。PCL-1和PCL-3的表觀分子質(zhì)量分別為4.2×103、1.8×104。②PCL-1和PCL-2均不含淀粉、蛋白質(zhì)，糖醛酸含量分別為含量分別為13.87％、46.34％，均為β-構(gòu)型糖苷鍵的吡喃糖。PCL-1由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖組成，摩爾組成比依次為0.68∶0.93∶0.12∶1;PCL-3由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖組成，摩爾組成比依次為0.52∶0.22∶0.22∶1∶0.17。③與模

7、型組比較，PCL高、低劑量組和陽性對照組糖尿病小鼠血糖明顯降低，小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)，血清和肝臟SOD活性明顯提高，MDA含量降低。PCL高劑量組與鹽酸二甲雙胍組比較，各觀察指標無顯著性差異。PCL能延長小鼠的負重游泳時間，降低了運動后血清尿素氮和血乳酸的增量，各劑量組肝糖原含量與正常組比較，無顯著性差異;PCL-1、PCL-2、PCL-3和PCL-4能清除·OH和O2-·，抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，對還原力沒有明顯影響。PCL-2

8、、PCL-3和PCL-4能抑制H2O2誘導(dǎo)紅細胞溶血，但PCL-1能促進H2O2誘導(dǎo)紅細胞溶血;PCL-1、PCL-2和PCL-3能顯著增強ConA誘導(dǎo)的T淋巴細胞和LPS誘導(dǎo)的B淋巴細胞的增殖作用，而PCL-4只能顯著增強LPS誘導(dǎo)的B淋巴細胞的增殖作用。
　　 結(jié)論:
　　 ①提取、分離、純化泰山四葉參總多糖及其主要組分的方法可行。②初步明確了泰山四葉多糖及其主要組分的理化特性。③PCL能降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠