丹黃方對(duì)急性肝衰竭大鼠IL-6及c-met影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的急性肝衰竭(AcuteLiverFailure，ALF)是一種嚴(yán)重危害人類健康、病情復(fù)雜兇險(xiǎn)臨床綜合征，病變可涉及多個(gè)器官，死亡率高達(dá)70％～80％。在基礎(chǔ)綜合治療齊同的情況下，加用中藥保護(hù)殘存肝細(xì)胞和促進(jìn)肝臟再生，提高存活率，就尤為重要。急性肝衰竭由于征候變化多端，病機(jī)錯(cuò)綜復(fù)雜，給臨床辨證論治帶來了諸多困難。但是我們認(rèn)為，本病癥雖然千變?nèi)f化，其病因病機(jī)不外“毒”、“瘀”兩字，毒為致病之因，瘀為病變之本，而毒與瘀又互為因果，因毒雖為

2、致病之因，若毒盛則必導(dǎo)致瘀盛，而瘀盛必定生毒，從而加重肝臟血瘀病變，形成惡性循環(huán)致瘀毒膠結(jié)難解的局面。因此我們認(rèn)為其治療的重要法則是，重在解毒，貴在化瘀。目前對(duì)肝衰竭的治療尚缺乏特別有效的藥物，我們據(jù)湖北中醫(yī)院肝病研究中心經(jīng)過多年中草藥研究經(jīng)驗(yàn)，自擬丹黃方按1：1比例進(jìn)行試驗(yàn)研究，采用丹參活性化瘀，減輕中毒性肝損傷和改善肝臟微循環(huán)作用，大黃通里攻下、排毒、抗菌消炎，針對(duì)肝衰竭毒盛血瘀的成因合而用之。本實(shí)驗(yàn)通過建立硫代乙酰胺致大鼠急性肝衰

3、竭模型，觀察肝功能、血清IL-6、肝細(xì)胞有絲分裂指數(shù)(MI)、c-met蛋白的變化，探討丹黃方對(duì)大鼠試驗(yàn)性急性肝衰竭的影響和可能作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療ALF提供科學(xué)理論依據(jù)。 方法1.為研究丹黃方對(duì)大鼠試驗(yàn)性急性肝衰竭的影響及可能機(jī)制，將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、模型對(duì)照組(B組)、肝生素組(C組)及丹黃小、中、大劑量組(D、E、F組)。試驗(yàn)開始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，除C組外所有動(dòng)物每日皮下注射5m1混合液(3ml10％葡萄糖、2m

4、l含適量生理鹽水與20μmol/LKC1)以防低血糖，C組予肝生素2mg/kg溶于防止低血糖的混合液中，每日皮下注射一次，持續(xù)3d。D、E、F組分別給等體積/重量比的相應(yīng)藥物灌胃(三組給藥劑量之比為1：5：10)，每日一次，持續(xù)3d，為保證給藥途徑的一致性，A、B、C組同時(shí)給與等體積/重量比的生理鹽水灌胃。試驗(yàn)第4d除A組皮下注射同等劑量的生理鹽水外，其余各組予TAA(600mg·kg-1體重，0h、24h皮下注射)造模。48h后取材。

5、 2.觀察造模后48h內(nèi)大鼠病死率，腹主動(dòng)脈無菌采血，檢測ALT、AST、TB及IL-6。 3.取肝組織制作切片，光鏡及電鏡觀察結(jié)構(gòu)變化。 4.取肝組織普通病理切片常規(guī)染色后，檢測肝細(xì)胞有絲分裂指數(shù)(MI)。 5.取肝組織免疫組織化學(xué)染色法檢測c-met蛋白。 結(jié)果1.丹黃方可以顯著改善ALF大鼠行為異常，提高存活率。 2.B組大鼠ALT、AST、TBil、IL-6水平均明顯高于A組(P＜

6、0.01)，C、D、E、F組上述指標(biāo)亦高于A組。丹黃方各劑量治療組上述指標(biāo)較B組均有所下降，其中，以F組下降值最多。且經(jīng)直線回歸相關(guān)分析顯示，大鼠血清IL-6水平與ALT、AST、TBiL均呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)；血清IL-6水平與各組大鼠肝臟壞死程度呈正相關(guān)。 3.鏡下觀察，B組大鼠肝細(xì)胞有不同程度的變性、壞死，壞死組織中有較多的炎性細(xì)胞及脂滴浸潤。與B組相比，C、D、E、F組肝細(xì)胞損傷程度和損傷面積均有改善，而以F組改

7、善最明顯。 4.正常組大鼠肝組織MI較低，與B、C組大鼠相比，差異顯著(P＜0.01)。丹黃方治療后，大鼠肝組織MI指數(shù)升高，且隨著丹黃方劑量的增加指數(shù)增加，丹黃中、大劑量組大鼠肝組織MI指數(shù)，與模型組相比，明顯升高(P＜0.01)。 5.正常組大鼠肝組織中，c-met表達(dá)水平最低，C組與B組之相比，差異顯著(P＜0.01)。丹黃方治療后，大鼠肝組織c-met指數(shù)介于C組和B組之間，且隨著丹黃方劑量的增加c-met指數(shù)增

8、加。 結(jié)論免疫損傷在ALF的發(fā)病機(jī)理中占有重要地位，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠急性肝衰竭時(shí)，ALT、AST、TBil、IL-6水平顯著升高，且肝損傷程度與IL-6水平升高相一致，提示IL-6參與TAA誘導(dǎo)的肝損害，證實(shí)了炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫性損傷在ALF中的作用。丹黃方預(yù)防用藥后，部分逆轉(zhuǎn)了TAA所致的肝損害；肝組織形態(tài)學(xué)的改變明顯減輕，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)來減輕肝損傷程度，促進(jìn)大鼠肝細(xì)胞有絲分裂，從而有效的促進(jìn)肝細(xì)胞的增