轉RCH10和AGLU1基因水稻后代的分子細胞學檢測及抗紋枯病的相關研究.pdf

1、由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kühn)引起的水稻紋枯病是我國水稻的“三大”病害之一。目前水稻種質庫中尚未發(fā)現(xiàn)有對紋枯病的高水平抗源，基因工程育種為選育具有廣譜抗性并且可以穩(wěn)定遺傳的抗病品種提供了可能而顯得非常重要。浙江大學首次將水稻幾丁質酶基因RCH10和苜蓿β-1，3-葡聚糖酶基因AGLU1雙價基因表達盒Z100轉化水稻，獲得了轉基因水稻并篩選出抗紋枯病株系YH-19和YH-24。 本研究對篩選出的抗紋

2、枯病轉基因水稻株系YH-19和YH-24的第六代(T6)進行了表達盒中基因的遺傳穩(wěn)定性及抗病性分析。PCR檢測發(fā)現(xiàn)所有被檢測的T6代轉基因植株保留NPTII基因，而15％的植株發(fā)生RCH10基因或AGLU1基因的丟失，其中1株被檢植株甚至丟失了RCH10和AGLU1雙基因。對保留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉基因植株進行Northern雜交和GUS組織化學染色的結果表明RCH10和AGLU1雙基因在這些T6轉基因植株中表達。這些保

3、留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉基因植株在接種紋枯菌后表現(xiàn)出的抗性顯著強于野生型水稻。 相應地，這些保留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉基因植株中的幾丁質酶和β-1，3-葡聚糖酶活性顯著高于野生型植株中的。免疫金標記幾丁質酶和β-1，3-葡聚糖酶也顯示二者在轉基因植物葉細胞中的含量顯著高于在野生型植物葉細胞中的，而且RCH10和AGLU1在轉基因植物葉細胞的葉綠體中積累。 本研究進一步建立了用臺盼藍或卡拉唑黑E