表達(dá)IBDV VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗的構(gòu)建及其免疫效力試驗(yàn).pdf

1、傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectiousbursal disease virus，IBDV)引起的雛雞急性、高度接觸性疾病。IBDV的感染對(duì)雛雞的法氏囊造成損傷，從而導(dǎo)致免疫抑制，增加了機(jī)體對(duì)其他疾病的易感性。為了克服弱毒活疫苗和中等毒力活疫苗的缺陷，本研究通過(guò)在火雞皰疹病毒(HVT) FC126毒株的US2復(fù)制非必需區(qū)，插入IBDV超強(qiáng)毒株的VP2基因，構(gòu)

2、建表達(dá)VP2蛋白的重組HVT疫苗毒株，旨在為研制預(yù)防IBD和馬立克氏病(MD)的二聯(lián)基因工程疫苗打下基礎(chǔ)。
　　本研究以IBDV XD2010超強(qiáng)毒株為模板，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增其VP2基因，利用HVTFC126疫苗株基因組US2同源序列、CMV啟動(dòng)子和綠色熒光蛋白(EGFP)基因，構(gòu)建含有VP2基因的轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pCMV-EGFP-VP2，以磷酸鈣沉淀法將轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒和HVTFC126基因組DNA共同轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)

3、，通過(guò)篩選、純化得到帶EGFP標(biāo)志的重組病毒rHVT-EGFP-VP2。利用Cre重組酶去除rHVT-EGFP-VP2基因組中的EGFP基因，重新轉(zhuǎn)染CEF細(xì)胞，經(jīng)篩選、純化得到不含EGFP基因的重組病毒rHVT-VP2。經(jīng)PCR、間接免疫熒光(IFA)和western blot鑒定，重組病毒rHVT-VP2可正確表達(dá)VP2蛋白。
　　在重組病毒rHVT-VP2對(duì)IBDV超強(qiáng)毒株的免疫保護(hù)試驗(yàn)中，設(shè)立rHVT-VP2疫苗組、中等毒

4、力疫苗組(N87)、空白對(duì)照組和攻毒對(duì)照組，從各試驗(yàn)組免疫后的法氏囊重量/體重（囊體比）的變化、發(fā)病率、死亡率、攻毒后的增重、抗體水平等方面進(jìn)行免疫保護(hù)效力的評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rHVT-VP2組免疫后法氏囊正常，而N87疫苗組免疫后法氏囊發(fā)生了萎縮;rHVT-VP2組及N87疫苗組攻毒后的發(fā)病率、死亡率與攻毒對(duì)照組相比差異極顯著;攻毒后rHVT-VP2組體重增重顯著高于N87疫苗組;利用本研究所建立的間接ELISA方法檢測(cè)IBDV抗體，發(fā)

5、現(xiàn)rHVT-VP2能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高水平的特異性抗體，并在一定時(shí)間內(nèi)持續(xù)升高，抗體水平明顯高于N87疫苗組;結(jié)合各組臨床癥狀及器官病理變化，得出結(jié)論:重組病毒rHVT-VP2有效抵抗IBDV超強(qiáng)毒株的攻擊，且免疫保護(hù)效力高于N87疫苗組。
　　重組病毒rHVT-VP2對(duì)MDV的免疫保護(hù)試驗(yàn)中，rHVT-VP2組對(duì)MD保護(hù)率和HVTFC126疫苗組保護(hù)率相當(dāng)，證明重組病毒rHVT-VP2能使機(jī)體產(chǎn)生較高的免疫保護(hù)力，足以抵抗MDV