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文檔簡介
1、目的:
研究銀杏葉總提取物(GBE)對H2O2誘發(fā)的再灌注損傷心肌細胞的保護作用,并探討其作用機制。
方法:
1.實驗采用胰酶消化法分離Wistar大鼠乳鼠的心肌細胞,差速貼壁法進行細胞培養(yǎng)。
2.用H2O2損傷心肌細胞,以此為心肌缺血再灌注損傷的實驗?zāi)P?。實驗組分為6組:正常對照組;H2O2損傷組;GBE保護組,加入GBE使其終濃度分別為50、100、150mg·L-1;陽性對照
2、組,加入異搏定。
3.用紫外分光光度計法、硫代巴比妥酸法、黃嘌呤氧化酶法分別測定細胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Lowry法測定細胞線粒體中蛋白含量;測定線粒體中琥珀酸脫氫酶(SDH)、細胞色素C氧化酶(CCO)比活力。
4.透射電鏡觀察心肌細胞的超微結(jié)構(gòu)。
結(jié)果:
1.與正常對照組相比,H2O2損傷組LDH溢出量和MD
3、A含量均明顯升高(p<0.05,p<0.001),SOD則明顯降低(p<0.01);SDH和CCO比活力在H2O2損傷組明顯下降(p<0.001)。透射電子顯微鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷明顯。
2.與H2O2損傷組相比,GBE不同濃度組能減少LDH和MDA的產(chǎn)生,成劑量依賴關(guān)系,其中150mg·L-1GBE組具有明顯的保護作用(p<0.001)。GBE不同濃度組能維持SOD活性與H2O2損傷組相比(p<0.001)、與正常
4、對照組相比無明顯變化(p>0.05)。50、100mg·L1-GBE組SDH及CCO比活力測定指標與正常組相比有不同程度的降低(p<0.05),與H2O2損傷組相比較活性降低,150mg·L-1GBE實驗組SDH及CCO比活力與正常對照組無明顯差異,與H2O2損傷組相比(p<0.01)。透射電子顯微鏡觀察顯示GBE保護組心肌細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯損傷,實驗結(jié)果表明GBE對H2O2誘導(dǎo)的再灌注損傷心肌細胞具有保護作用。
結(jié)論:<
5、br> 1.100umol·L-1的H2O2能夠引起乳鼠心肌細胞損傷。此時心肌組織中脂質(zhì)過氧化物明顯增多,心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷嚴重,心肌發(fā)生嚴重再灌注損傷。
2.不同濃度的GBE能明顯降低心肌細胞的氧化應(yīng)激反應(yīng),維持細胞中線粒體正常的呼吸及能量代謝。
3.GBE對缺血再灌注損傷心肌細胞具有很好的保護作用,保護效果優(yōu)于異搏定。其保護機制與其抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)進行和增加心肌能量儲備有關(guān)。
4.
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