絲-蘇氨酸蛋白磷酸酶信號傳導(dǎo)通路在房顫電重構(gòu)中作用的研究.pdf

1、背景和目的：房顫(atrial fibrillation，AF)是臨床上最常見的心律失常之一，目前已經(jīng)成為影響公眾健康的重要疾病，但房顫防治的總體效果仍不理想，主要原因還是在于對房顫的確切發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。目前普遍認(rèn)為電重構(gòu)在房顫發(fā)生和維持中起著至關(guān)重要的作用。心房肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載是所有房顫動物模型和臨床患者共同一致的電重構(gòu)改變，但鈣超載的機(jī)制目前仍不清楚。 心肌細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+的回收和細(xì)胞內(nèi)儲存依賴于肌漿網(wǎng)上Ca2+-AT

2、P酶(sarcoplasmie reticulum ca2+-adenosine triphophatase，Serca2a)的調(diào)節(jié)。Serca2a可被磷酸化的受磷蛋白(phospholamban，PLB)激活。既往研究發(fā)現(xiàn)蛋白激酶(proteinkinase，PK)可通過PLB第17位點的蘇氨酸殘基而對其發(fā)揮重要的磷酸化調(diào)節(jié)作用。近來研究顯示絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶(serine/threonine PPs，Ser/Thr PPs)也廣泛

3、參與蛋白磷酸化的調(diào)節(jié)。然而PLB的磷酸化水平與Ser/Thr PPs的相互作用卻知之甚少。 心房肌中存在1型(type 1 Ser/ThrPPs，PP1)、2A型(type2A Ser/Thr PPs，PP2A)及2B型Ser/Thr PPs(type 2B Ser/Thr PPs，PP2B)，本研究目的在于明確房顫患者是否存在PP1租PP2A的活性狀態(tài)的變化，探討Ser/Thr PPs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及調(diào)控的下游信號分子在慢性房顫

4、發(fā)生和發(fā)展過程中的作用。 材料和方法：選擇體外循環(huán)手術(shù)患者30例(年齡大于18歲)，含竇性心率(sinusrhythm，SR)患者14例和慢性房顫(chronic atrial fibrillation，CAF)患者16例，房顫患者持續(xù)時間均大于6個月。 1.在術(shù)中體外循環(huán)開始后立即取右心房組織約200mg，冷生理鹽水沖洗后，迅速放置于液氮中，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存。 2.Western Blot法檢測心房肌

5、組織中PLB和PLBp-Ser16蛋白表達(dá)并分析PLB的相對磷酸化水平。 3.化學(xué)發(fā)光法檢測心房肌組織中PP1和PP2A活性。 4.RT-PCR法檢測心房肌組織中PP1/PP2A的mRNA表達(dá)。 結(jié)果： 1.患者資料：兩組間在年齡、瓣膜病以及先天性心臟病患病率上存在顯著差異(P<0.01)。術(shù)前超聲心動圖檢查提示CAF組左房直徑明顯高于SR組而左室射血分?jǐn)?shù)明顯低于SR組(P<0.01)，左室舒張術(shù)期內(nèi)徑、

6、室間隔厚度、左室后壁等血流動力學(xué)指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)。 2.Western Blot：CAF組PLB蛋白表達(dá)水平、PLBp-Ser16以及PLB相對磷酸化水平(PLBp-Ser16/pLB)均明顯低于SR組(P<0.01)。 3.RT-PCR：CAF組心房肌組織PP1和PP2A的mRNA表達(dá)與SR組比較無明顯差異(P>0.05)。 4.PP1/PP2A活性：CAF組心房肌中PP1/PP2A活性明顯高于S

7、R組(P<0.01)。 5.直線相關(guān)分析：①PP1/PP2A活性與PLBp-Ser16表達(dá)水平成負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.55和-0.67(P<0.01)；②PP1/PP2A活性與房顫持續(xù)時間呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.69和0.74(P<0.01)，而與年齡、左房直徑、左室舒張末期直徑以及射血分?jǐn)?shù)等參數(shù)均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。 結(jié)論： 1.慢性房顫時存在PLB相對磷酸化水平下降，推測PLB可能是連接蛋白磷