加替沙星殼聚糖納米粒子的制備、體外性質(zhì)研究及眼表毒性實驗.pdf

1、目的：制備一種新型的眼表制劑--加替沙星殼聚糖納米粒子,初步研究其體外性質(zhì)及眼表毒性,為研發(fā)新型眼表緩釋制劑提供新的思路,為納米藥物的眼表應(yīng)用提供相關(guān)前期實驗依據(jù)。本實驗分為三部分：實驗一:離子交聯(lián)法制備加替沙星殼聚糖納米粒子；實驗二:加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液的體外性質(zhì)研究；實驗三:加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液的兔眼表毒性實驗。
　　 方法：實驗一：采用離子交聯(lián)法制備加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液,用正交試驗法對影響實驗結(jié)果的

2、三個主要因素進行優(yōu)選(殼聚糖、多聚磷酸鈉、加替沙星原料藥三者的濃度),選擇四個納米粒子混懸液的主要技術(shù)參數(shù)作為考察指標(納米粒子粒徑,Zeta電位,載藥量,包封率)。實驗二：按照實驗一的方法,制備9組加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液。每一組分別對其性質(zhì)進行檢測:透射電鏡檢測其形態(tài),激光粒徑分析儀檢測其平均粒徑及Zeta電位,高效液相色譜法檢測其載藥量及包封率。通過方差分析,選定實驗組3作為優(yōu)選組。實驗三：按照實驗一的方法采用實驗組3的濃度配

3、比制備加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液。雌性新西蘭大白兔5只,右眼為實驗眼,左眼為對照眼,實驗眼予30μL3.0 mg/mL加替沙星殼聚糖納米粒子混懸液滴眼,每30分鐘一次,達到6小時。對照眼在相同時間滴入生理鹽水。根據(jù)經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(Organization for EconomicCooperation and Development,OECD)在1987年制定的眼表刺激性實驗評分系統(tǒng),對實驗眼及對照眼在首次滴入后的3、6、24小時

4、進行評分。評分后將實驗兔深麻醉后采用空氣栓塞法處死,分別取兔眼角膜、結(jié)膜及眼瞼組織固定,行組織病理學(xué)檢測及超微結(jié)構(gòu)學(xué)檢測,觀察實驗眼及對照眼的形態(tài)學(xué)有無差異。
　　 結(jié)果：實驗一：采用離子交聯(lián)法制備出了不同濃度的淡藍色乳光懸液,懸液既不完全澄清,也不產(chǎn)生沉淀,Tyndall實驗陽性。實驗二：通過正交試驗優(yōu)選組的濃度配比如下:殼聚糖0.10(％w/v)、多聚磷酸鈉0.10(％w/v)、加替沙星0.15(％w/v)。透射電鏡下顯示為

5、形態(tài)規(guī)則的球形結(jié)構(gòu)。對混懸液的性質(zhì)檢測如下:平均粒徑232nm,Zeta電位32mV,包封率67.04％,載藥量11％。實驗三：在首次滴入混懸液后的24小時,實驗眼臨床評分為1,對照眼評分為0。實驗眼及對照眼的角膜、結(jié)膜及眼瞼組織行光鏡及電鏡檢測顯示均無炎癥反應(yīng)表現(xiàn)。
　　 結(jié)論：⑴離子交聯(lián)法是一種簡便、重復(fù)性好的制備納米粒子混懸液的方法；丁達爾現(xiàn)象能鑒別混懸液與溶液。⑵采用正交試驗設(shè)計的方法能優(yōu)選出質(zhì)量指標最佳的濃度配比,通過