正常大鼠視網(wǎng)膜電圖特性及體溫對其影響的研究.pdf

1、第一部分 目的：閃光視網(wǎng)膜電圖是視網(wǎng)膜在光刺激下產(chǎn)生的一組總和電反應(yīng)，是研究視網(wǎng)膜功能的有效工具之一。本實驗旨在探討正常SD大鼠全麻狀態(tài)下閃光視網(wǎng)膜電圖的波形特點。 方法： 健康成年SD大鼠6只，體重250～300g。實驗前預先暗適應(yīng)12小時，記錄前20分鐘對每只大鼠的雙眼用0．5％復方托品卡胺滴眼液散瞳，暗紅燈下用速眠新Ⅱ注射液(0．8ml/kg)肌肉注射麻醉。雙眼角膜表面安放自制螺旋狀銀一氯化銀電極，不銹鋼針

2、狀電極用作參考電極和接地電極，分別置于同側(cè)面頰部和尾部皮下。在完全暗適應(yīng)狀態(tài)下，首先利用中性濾光片降低全視野刺激器固有光強度，將刺激光強度按0．5個對數(shù)單位的間隔衰減成11檔(分另0為-5．0、-4．5、-4．0、-3．5、-3．O、-2．5、-2．O、-1．5、-1．0、-0．5、0Logcd·s·m-2)，記錄暗適應(yīng)系列光視網(wǎng)膜電圖(Scot-ERG)，然后參照國際電生理協(xié)會制定的標準，記錄振蕩電位(0Ps)、明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(Ph

3、ot-ERG)和20Hz閃爍反應(yīng)(Flicker-ERG)，測量各波潛伏期和幅值，并采用Naka-Rushton方法分析了暗適應(yīng)系列光ERGb波振幅一刺激光強的關(guān)系(V-LogI)。 結(jié)果： 1．本實驗中用最弱的閃光(-5．0logcd·s·m-2)刺激視網(wǎng)膜時，2只大鼠可記錄到暗視閾值反應(yīng)(STR)； 2．SD大鼠暗視b波閾強度為-5．Ologcd·s·m-2(人類為-4．Ologcd．s·m·2左右)，用強度

4、為-5．0～-2．0logcd·s·m-2的從弱到強遞增的閃光刺激視網(wǎng)膜時，記錄到的ERG為一單純的b波，波形光滑，隨著光強的增大b波潛伏期縮短，反應(yīng)幅值逐漸增大，當刺激強度≥-2．0logcd·s·m-2時b波幅值趨向飽和(人類飽和強度為-1．0logcd·s·m-2左右)，該強度時a波、OPs波開始出現(xiàn)； 3．上述暗適應(yīng)ERGb波幅值與光強之間的函數(shù)關(guān)系曲線呈“S”型，符合Naka-Rushton等式，b波飽和幅值(bmax

5、)為(721.2±89．5)uV，產(chǎn)生1/2飽和幅值的刺激強度(I50)為(-3．3±0．36)logcd·s·m-2； 4．正常SD大鼠視網(wǎng)膜電圖暗視和明視兩種成分比較顯示視桿系統(tǒng)信號明顯強于視錐系統(tǒng)； 5．ERG雙眼同時記錄，取相對b波幅值作為觀察指標，其變異為1．9％～9．0％，明顯低于單眼記錄b波振幅的變異值(10％～30％)。 結(jié)論： 1．SD大鼠暗適應(yīng)ERG檢測中，全面評價視桿系統(tǒng)功能時需要利

6、用中性濾光片降低刺激器固有光強度至-5．O～-2．Ologcd·s·m-2范圍，該強度遠低于臨床上常用于人的刺激光強； 2．利用Naka—Rushton方法分析了暗適應(yīng)b波光強．反應(yīng)曲線，得到正常SD大鼠bmax為(721.2±89．5)uV，I50為(-3．3±O．36)logcd·s·m-2； 3．正常SD大鼠視桿系統(tǒng)信號明顯強于視錐系統(tǒng)，這符合其慣于在夜間活動的生活習性，因此SD大鼠適于作為桿體功能研究的動物模型；

7、 4．動物實驗中采用雙眼同時記錄，以對側(cè)眼作為參照的方法可以有效地減小個體差異。 第二部分 目的：某些動物實驗(如視覺電生理檢測)對體溫有特殊要求，維持體溫穩(wěn)定對實驗結(jié)果的可靠性和可重復性至關(guān)重要。本研究旨在探討不同環(huán)境溫度對全麻狀態(tài)下大鼠體溫的影響，為相關(guān)動物實驗中室溫的選擇提供依據(jù)。 方法： 36只全麻狀態(tài)SD大鼠，根據(jù)實驗室環(huán)境溫度設(shè)置的不同，隨機分為6組：Ⅰ組(15±1)℃，Ⅱ組(20±1

8、)℃，Ⅲ組(25±1)℃，Ⅳ組(30±1)℃，V組(35±1)℃，Ⅵ組(40±1)℃；每組6只大鼠。用水銀體溫計監(jiān)測直腸溫度，記錄麻醉誘導前，誘導后10、20、30和40min(T0～T40)5個時間點的體溫，分析大鼠體溫改變同實驗室環(huán)境溫度的關(guān)系。 結(jié)果： L大鼠麻醉前I～Ⅳ組體溫(T0)均在38．0～38．1℃之間，各組間無統(tǒng)計學差異(P＞0．05)，而Ⅴ組T0均值為38．65℃，明顯高于Ⅰ～Ⅳ組麻醉前體溫(P＜O．

9、05)，Ⅵ組T0均值高達39．30C，與I～Ⅳ組相比，差異更顯著(P＜0．01)； 2．全麻前后同一室溫下不同時間點體溫變化(以T0作為對照)： ①Ⅰ、Ⅱ組體溫下降，其中Ⅱ組T30平均溫度為(36．72±0．58)℃，較T0下降了(1．37±0．45)℃，P＜0．0l，有統(tǒng)計學意義，與Ⅱ組相比，Ⅰ組降溫效應(yīng)更加明顯； ②Ⅲ、Ⅳ組體溫基本穩(wěn)定，T10～T40各時間點體溫值與T0相比無顯著改變(P＞0．05)；

10、 ③Ⅴ、Ⅵ組體溫升高，其中Ⅴ組T10平均溫度為(39．52±0．34)℃，較T上升了(0．87±0．31)℃，經(jīng)統(tǒng)計學分析，P＜0．05，T20平均溫度為(40．02±0．57)℃，與T0相比差異更顯(P＜0．0D，Ⅵ組升溫效應(yīng)較Ⅴ組更加明顯； 3．全麻后不同室溫下同一時間點體溫比較(以Ⅲ/Ⅳ組作為對照)： ①Ⅱ組與Ⅲ/Ⅳ組之間在T30和T40差異非常顯著(P<0．01)，Ⅰ組與Ⅲ/Ⅳ組之間在T10～T40比較差異均非

11、常顯著(P

12、檢測)中室溫的選擇范圍。 第三部分 目的：體溫因素對神經(jīng)系統(tǒng)功能的檢查影響很大，維持體溫穩(wěn)定對實驗結(jié)果的可靠性和可重復性至關(guān)重要。本研究通過制造不同的動物體溫模型(包括體溫升高和降低兩種模型)，觀察體溫變化對暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖、振蕩電位、明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖和閃爍反應(yīng)的影響，為今后實驗小動物視網(wǎng)膜電圖記錄標準化方案的制定提供科學依據(jù)。 方法： 1．動物分組：健康成年SD大鼠12只，體重250～300g。隨機分為

13、2組，每組6只。根據(jù)論文第二部分實驗結(jié)果將實驗室內(nèi)環(huán)境溫度設(shè)置如下，①體溫降低組：設(shè)置環(huán)境溫度≤(25±1)℃，②體溫升高組：設(shè)置環(huán)境溫度≥(30±1)℃。 2．體溫干預：通過室內(nèi)空調(diào)系統(tǒng)動態(tài)調(diào)控環(huán)境溫度。用涂有石蠟油的水銀體溫計插入動物肛內(nèi)2．5cm，監(jiān)測直腸溫度，其中體溫降低組根據(jù)肛溫情況逐漸下調(diào)環(huán)境溫度，使體溫變化控制在每4～6min下降1℃，而體溫升高組根據(jù)肛溫情況逐漸上調(diào)環(huán)境溫度，使體溫變化控制在每4～6min上升1℃

14、。根據(jù)論文第二部分結(jié)果，全麻大鼠ERG檢測期間，正常體溫為38℃左右，本實驗以38℃作為基礎(chǔ)體溫，每改變1℃檢測1次ERG，體溫降低組至33℃時結(jié)束記錄，體溫升高組至42℃時結(jié)束記錄。根據(jù)文獻，全麻動物體溫維持穩(wěn)定時，可以排除麻醉時間(深度)對結(jié)果的影響。 3．視網(wǎng)膜電圖記錄：實驗前預先暗適應(yīng)12小時，記錄前20分鐘對每只大鼠的右眼(實驗眼)用0．5％復方托品卡胺滴眼液散瞳，暗紅燈下用速眠新Ⅱ注射液(0．8ml/kg)肌肉注射麻

15、醉。右眼角膜表面安放自制螺旋狀銀一氯化銀電極，不銹鋼針狀電極用作參考電極和接地電極，分別置于右側(cè)面頰部和尾部皮下。左眼用黑色眼罩完全遮蓋。記錄前補暗適應(yīng)5min。采用RETI-port系統(tǒng)，記錄暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖、振蕩電位、明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖和20Hz閃爍反應(yīng)。觀察不同體溫點ERGa、b波，OPs02波和20Hz閃爍反應(yīng)Pl波潛伏期和幅值的變化。 結(jié)果： 1.體溫降低對SD大鼠ERG各波潛時的影響 體溫降低引起ERG

16、各波潛伏期延長，潛時對體溫降低的反應(yīng)比幅值敏感。當體溫為36℃時，暗適應(yīng)ERG-2．5logcd·s·m-2光強下b波潛時較正常體溫(38℃)時延長12．7％，最先出現(xiàn)顯著改變。 2．體溫降低對SD大鼠ERG各波振幅的影響 ERG各波振幅個體差異較大，易受多種因素的影響，可復性不及潛伏期好，但幅值降低是主要表現(xiàn)。當體溫為35℃時，暗適應(yīng)ERG中除最大刺激光強度(Ologcd·s·m-2)外，其余強度下b波幅值均顯著改變，

17、其平均降幅為16．9％，隨著體溫進一步降低，波幅下降更加顯著，當體溫降至33℃時，各刺激強度平均降幅達22．6％。 3．體溫升高對SD大鼠ERG各波潛時的影響 暗適應(yīng)ERGa波潛伏期隨體溫升高(38～42℃)有縮短趨勢，但變化幅度不大，當體溫升至42℃時，各刺激強度平均縮短僅5．4％。 4．體溫升高對振幅的影響 體溫升高對各波幅值的影響無一定規(guī)律，這可能與幅值易受多種因素影響，可復性不及潛伏期有關(guān)。