大鼠視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導(dǎo)的研究.pdf

1、第一部分:大鼠視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導(dǎo)
　　研究目的：在于探討視網(wǎng)膜血管各級(jí)血管之間相互的電緊張聯(lián)系,進(jìn)一步了解視網(wǎng)膜血管收縮舒張的自主調(diào)節(jié)機(jī)制。選用成年Long-Evans大鼠,新鮮分離視網(wǎng)膜血管,臺(tái)盼藍(lán)染色觀察其細(xì)胞活性,玻璃電極封接血管壁層細(xì)胞,穿孔膜片鉗單記錄觀察各級(jí)血管電流-電壓(Ⅰ-Ⅴ)關(guān)系,并利用穿孔膜片鉗雙記錄觀察各級(jí)血管電緊張傳導(dǎo),探討其電緊張傳導(dǎo)模式。
　　結(jié)果顯示:新鮮分離的視網(wǎng)膜血管可穩(wěn)定獲得,按血管管

2、腔大小、壁層細(xì)胞密度和形態(tài),可將獲得的視網(wǎng)膜血管分為第二級(jí)小動(dòng)脈、第三級(jí)小動(dòng)脈及毛細(xì)血管三級(jí)。各級(jí)血管的細(xì)胞的成活率為90％以上,顯微鏡下清晰可辨各級(jí)血管壁層細(xì)胞,適于膜片鉗記錄其離子變化;視網(wǎng)膜各級(jí)血管壁層細(xì)胞單一電生理記錄顯示,各級(jí)血管的靜息電位為-38±1mV(n=27),-42±1mV(n=29)和-45±1mV(n=10),經(jīng)單因素方差分析無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.27)。當(dāng)細(xì)胞膜電壓為-50mv時(shí),各級(jí)血管的輸入電阻分別為:

3、175±19MΩ(n=27),151±9MQ(n=29)和127±15MQ(n=10),單因素方差分析無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.58)。于壁層細(xì)胞行膜片鉗雙記錄,結(jié)果發(fā)現(xiàn),電緊張傳導(dǎo)沿毛細(xì)血管水平軸向最為高效,其電緊張傳導(dǎo)比為0.56±0.15(n=27),每100μm的衰減僅為2±2％(n=27);在第三級(jí)小動(dòng)脈,其電緊張傳導(dǎo)比為0.27±0.09(n=22),每100μm的衰減僅為6±8％(n=22);在第二級(jí)小動(dòng)脈,電緊張傳導(dǎo)比為

4、0.25±0.19(n=10),每100μm的衰減為6±8％(n=10)。三組間的衰減率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　研究發(fā)現(xiàn),視網(wǎng)膜血管的電緊張傳導(dǎo)主要通路為壁層細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞-壁層細(xì)胞,各級(jí)血管內(nèi)部的水平軸向傳導(dǎo)高效,尤以毛細(xì)血管傳導(dǎo)效率最高,傳導(dǎo)的衰減主要發(fā)生于壁層細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間,以及跨各級(jí)血管的水平軸向傳導(dǎo)之間。
　　第二部分:血管緊張素Ⅱ?qū)Υ笫笠暰W(wǎng)膜血管電緊張傳導(dǎo)的影響
　　目的：在于研究血管活性因子——血管緊張

5、素Ⅱ?qū)σ暰W(wǎng)膜血管自主調(diào)控的影響。選用成年Lonh-Evans大鼠,新鮮分離視網(wǎng)膜血管,免疫組織化學(xué)顯示血管緊張素Ⅱ1型受體在血管上的表達(dá),利用穿孔膜片鉗單記錄觀察500nM血管緊張素Ⅱ?qū)σ暰W(wǎng)膜各級(jí)血管電生理的影響,利用鈣離子顯像觀察500nM血管緊張素Ⅱ在視網(wǎng)膜各級(jí)血管壁層細(xì)胞引起的細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化,并利用穿孔膜片鉗雙記錄觀察其對(duì)視網(wǎng)膜血管電緊張傳導(dǎo)的影響。
　　結(jié)果顯示:視網(wǎng)膜各級(jí)血管均表達(dá)血管緊張素Ⅱ1型受體,形態(tài)學(xué)分布未見

6、明顯差異。500nM血管緊張素Ⅱ引起壁層細(xì)胞非選擇性陽離子通道開放,電流產(chǎn)生主要部位為毛細(xì)血管,從-108mV至-38mV,產(chǎn)生的內(nèi)向電流明顯大于生理對(duì)照:從+12mV至+22mV,外向電流亦明顯大于對(duì)照(n=8,P＜0.0001)。然而,在第三級(jí)小動(dòng)脈和第二級(jí)小動(dòng)脈,500nM血管緊張素Ⅱ引起的電流變化明顯小于毛細(xì)血管的電流變化,與生理對(duì)照相比亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。500nM血管緊張素Ⅱ引起壁層細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高的主要部位亦是毛細(xì)血管,其周細(xì)

7、胞鈣離子濃度改變最大值達(dá)325±20nM(n=81),明顯高于第三級(jí)小動(dòng)脈肌細(xì)胞鈣離子濃度變化(55±3nM,n=149,P＜0.0001)和第二級(jí)小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣離子濃度變化(10±2nM,n=130,P＜0.0001)。500nM血管緊張素Ⅱ明顯抑制視網(wǎng)膜各級(jí)血管水平軸向電緊張傳導(dǎo)(每100μm衰減率～50％),但是對(duì)壁層細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞之間的傳導(dǎo)無明顯作用。
　　研究發(fā)現(xiàn):在視網(wǎng)膜血管,雖然血管緊張素Ⅱ1型受體分布于視網(wǎng)膜各