流式熒光微球技術(shù)免疫檢測(cè)氯霉素和鹽酸克倫特羅殘留.pdf

1、氯霉素（chloramphenicol）和鹽酸克倫特羅（clenbuterol hydrochloride）曾作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)。然而，在使用中人們發(fā)現(xiàn)其在動(dòng)物源性食品中殘留會(huì)引起嚴(yán)重的后果，威脅人們的身體健康。目前已被列為禁用獸藥，但是一些不法商人為了追求經(jīng)濟(jì)利益依然非法使用。雖然檢測(cè)氯霉素和鹽酸克倫特羅殘留的方法很多，如氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜法（MS）、酶聯(lián)免疫法（ELISA）、熒光免疫

2、法（FIA）等，但是這些方法或存在操作步驟復(fù)雜，儀器價(jià)格昂貴的缺點(diǎn)，或是靈敏度不夠高、信息量低、只能進(jìn)行單目標(biāo)檢測(cè)。
　　 因此，建立快速、靈敏、同步檢測(cè)氯霉素和鹽酸克倫特羅的方法，對(duì)于保護(hù)消費(fèi)者利益，對(duì)于食品安全檢測(cè)以及國(guó)際貿(mào)易都有重要的意義。本研究在制備偶聯(lián)抗原、熒光探針等相關(guān)試劑的基礎(chǔ)上，應(yīng)用流式熒光微球技術(shù)建立了一種高通量、快速、靈敏檢測(cè)氯霉素、克倫特羅等獸藥殘留的方法。
　　 結(jié)果表明，氯霉素、鹽酸克倫特羅分別

3、通過(guò)重氮化法與牛血清白蛋白連接合成了偶聯(lián)抗原，經(jīng)紫外、生物質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)證明半抗原與載體蛋白偶聯(lián)成功，偶聯(lián)比分別為13和16。異硫氰酸熒光素標(biāo)記氯霉素單克隆抗體和克倫特羅單克隆抗體制備熒光探針，經(jīng)毛細(xì)管電泳、熒光分光光度計(jì)分析證明連接成功，通過(guò)流式細(xì)胞儀可以檢測(cè)到熒光探針的信號(hào)。
　　 氯霉素偶聯(lián)抗原為10μg或克倫特羅偶聯(lián)抗原為5μg條件下與熒光微球的偶聯(lián)效率最高；氯霉素單克隆抗體和克倫特羅單克隆抗體分別在220ng/mL和70.5

4、ng/mL條件下，應(yīng)用流式熒光微球技術(shù)檢測(cè)氯霉素和克倫特羅的靈敏度最高。檢測(cè)限分別為0.05ng/mL、0.01ng/mL，高于ELISA檢測(cè)的靈敏度（0.1ng/mL、0.5ng/mL）。檢測(cè)范圍分別為0.05-100ng/mL、0.01-100ng/mL，且從檢測(cè)微球制備到得到檢測(cè)結(jié)果僅需3.5小時(shí)。
　　 將建立的流式熒光微球技術(shù)用于檢測(cè)豬尿中氯霉素、克倫特羅殘留，平均加標(biāo)回收率為96％-119％，檢測(cè)脫脂奶粉中氯霉素、克