腺病毒增強轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)的針對突變型p53的大酶促進肝癌細(xì)胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:觀察腺病毒增強轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)法(AVET)將針對突變型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme,Mz)基因轉(zhuǎn)入肝癌細(xì)胞后對肝癌細(xì)胞凋亡的影響,探索AVET用于肝癌基因治療的可行性.方法:選用帶有mtp53基因的人肝癌細(xì)胞株MHCC97細(xì)胞,常規(guī)條件下培養(yǎng).將培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi),分為5組:①空白對照組:不加任何干預(yù);②脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染核酶對照組(lipo-pEGFPMz);③脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染空載體組(lipo-pEGFP)

2、;④AVET轉(zhuǎn)染核酶組(AVET-pEGFPMz);⑤AVET轉(zhuǎn)染空載體組(AVET-pEGFP).轉(zhuǎn)染后48小時,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測mtp53表達(dá)水平的變化,DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后對細(xì)胞凋亡的影響.結(jié)論:腺病毒增強轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)可將pEGFP-Maxizyme有效的轉(zhuǎn)染到肝癌細(xì)胞株MHCC97中,Maxizyme在細(xì)胞內(nèi)成功的切割了mtp53 mRNA