血漿Hcy水平及其代謝影響因素與阿爾茨海默病關(guān)系的研究.pdf

1、同型半胱氨酸(Hcy)是一種含硫氨基酸，由蛋氨酸去甲基產(chǎn)生。Hcy可在亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、蛋氨酸合成酶(MS)的催化下，以葉酸、VitB<,12>為輔酶再甲基化為蛋氨酸。血漿Hcy水平同時(shí)受環(huán)境因素和遺傳的影響。MTHFR基因的一個(gè)最常見的突變是C677T，其可致MTHFR活性下降，使血漿Hcy水平升高；MS基因突變可能是引起血漿Hcy水平升高的另一重要原因。葉酸、VitB<,12>缺乏與血漿Hcy水平升高有關(guān)。目前的大

2、量研究顯示，高Hcy血癥是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。1998年Clarke提出高Hcy血癥與阿爾茨海默病(AD)相關(guān)，隨后國外有研究認(rèn)為高Hcy血癥是AD的危險(xiǎn)因素，但目前仍存在很大爭(zhēng)議。國內(nèi)有關(guān)血漿Hcy代謝異常與AD之間關(guān)系的研究未見系統(tǒng)研究報(bào)道，特別對(duì)合并血管疾病的AD患者，其血漿Hcy水平的研究更是空白。 目的:探討我國漢族人AD患者血漿Hcy、葉酸、VitB<,12>水平及Hcy代謝相關(guān)酶基因MTHFR C677T、

3、MS A2756G多態(tài)性的特點(diǎn)，了解血漿Hcy水平及其代謝影響因素與AD的關(guān)系；通過給予AD患者服用葉酸、VitB<,12>，探討葉酸、VitB<,12>對(duì)AD患者血漿Hcy水平的影響。 材料與方法: 1、研究對(duì)象：漢族人，年齡≥60歲，各研究對(duì)象間無血緣關(guān)系。AD組75例，符合美國神經(jīng)病學(xué)、語言障礙和卒中-老年性癡呆和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)(NINCDS-ADRDA)診斷AD標(biāo)準(zhǔn)中“很可能AD”標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)臨床癡呆量表(CDR)評(píng)

4、分分組，分為輕中度AD和重度AD；對(duì)照組共71例，無癡呆及神經(jīng)系統(tǒng)變性病，性別、年齡、合并癥與AD組相匹配。所有研究對(duì)象入選4月內(nèi)無腦梗塞及心肌梗死發(fā)作，均除外惡性腫瘤、肝腎功能不全、甲狀腺疾病、嚴(yán)重營養(yǎng)不良等疾病及排除近1個(gè)月內(nèi)服用影響血漿Hcy水平的藥物(如：避孕藥、抗癲癇藥物、多巴胺類藥物、葉酸、VitB<,12>等)者。 2、收集血標(biāo)本：抽取研究對(duì)象清晨空腹靜脈血3ml，置于含有2％乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)100ul

5、試管中的，分離出血細(xì)胞、血漿，-20℃保存。 3、人外周血白細(xì)胞DNA的提?。喝⊙?xì)胞，用北京賽百勝公司的DNA抽提試劑盒，抽提基因組DNA。 4、參考國內(nèi)外文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物，分別擴(kuò)增MTHFR、MS目標(biāo)基因片斷，分別用限制性內(nèi)切酶HinfⅠ、Hae Ⅲ酶切，瓊脂糖凝膠電泳觀察判斷相應(yīng)的基因型。 5、血漿Hcy、葉酸、VitB<,12>濃度測(cè)定：取-20℃保存血漿，用熒光偏振免疫分析法(FPIA)檢測(cè)血漿Hcy濃度。

6、微粒子酶免分析法(MELA)測(cè)定血漿葉酸、VitB<,12>濃度。 6、葉酸、VitB<,12>干預(yù)治療：隨機(jī)選取32例AD接受8周維生素干預(yù)治療，給予口服葉酸5mg及VitB<,12> 500μg，每同1次，在治療4周、8周時(shí)復(fù)查血漿Hcy、葉酸、VitB<,12>濃度。 7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 結(jié)論: 1、AD患者存在血漿Hcy水平升高及葉酸、VitB<,12>水平降低，

7、AD患者血漿Hcy水平與葉酸、VitB<,12>水平呈負(fù)相關(guān)。 2、AD患者血漿Hey水平與癡呆程度相關(guān)，癡呆程度越嚴(yán)重，血漿Hcy水平越高。 3、AD患者高Hcy血癥發(fā)生率高，可能是AD的危險(xiǎn)因素，其產(chǎn)生與體內(nèi)葉酸、VitB<,12>不足有關(guān)，與MTHFR基因C677T及MS基因A2756G多態(tài)性無明顯相關(guān)。 4、MTHFR基因C677T及MS基因A2756G多態(tài)性與AD發(fā)生不相關(guān)。 5、口服常規(guī)劑量葉