USP22誘導(dǎo)自噬及對(duì)胰腺癌患者預(yù)后的影響.pdf

1、目的:胰腺癌是人類常見(jiàn)的腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率逐年上升。目前外科手術(shù)結(jié)合化療和放療的綜合治療是胰腺癌的主要治療手段，但預(yù)后尚不理想。因此，尋找胰腺癌新的治療靶點(diǎn)是人們目前研究的方向之一。泛素特異性蛋白酶22(Ubiquitin-specific protease22， USP22)是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)組蛋白乙酰化復(fù)合體SAGA的組成部分，與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控相關(guān)，并且與癌癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后具有密切的聯(lián)系。自噬是細(xì)胞的自我降解，既能促進(jìn)細(xì)胞生存也

2、能導(dǎo)致細(xì)胞死亡，胰腺癌中自噬水平高于其他上皮惡性腫瘤。LC3(Microtubule-associate protein1 lightchain3)是組成自噬小體的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)蛋白，被用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的自噬。USP22與自噬對(duì)癌癥的發(fā)生發(fā)展都有一定的作用，但是兩者之間的關(guān)系尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究胰腺癌組織中USP22與自噬的相關(guān)性及其對(duì)預(yù)后的影響，胰腺癌細(xì)胞Panc-1中USP22對(duì)自噬的影響，觀察USP22及自噬對(duì)Panc-1細(xì)胞生存能力

3、的影響，探索USP22對(duì)胰腺癌細(xì)胞的分子生物學(xué)機(jī)制，為胰腺癌的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:利用石蠟包埋法對(duì)胰腺癌及癌旁組織進(jìn)行切片，用免疫組化檢測(cè)各組織中USP22、LC3蛋白的表達(dá)情況，并查閱病歷，隨訪，分析USP22、自噬及胰腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　傳代培養(yǎng)胰腺癌Panc-1細(xì)胞株，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。利用脂質(zhì)體法將USP22過(guò)表達(dá)質(zhì)粒/USP22干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺癌Panc-1細(xì)胞株，獲得USP22過(guò)表

4、達(dá)Panc-1細(xì)胞/和USP22干擾Panc-1細(xì)胞。將細(xì)胞分為三組，分別為USP22過(guò)表達(dá)組、USP22干擾組及空白對(duì)照組，用western blot、免疫熒光、電鏡等方法檢測(cè)USP22與自噬的關(guān)系。利用細(xì)胞通路抑制劑LY294002（PI3K抑制劑）及PD98059（ERK1/2抑制劑）抑制信號(hào)通路，western blot法檢測(cè)USP22影響自噬的信號(hào)通路。自噬抑制劑3-MA抑制自噬，用流式細(xì)胞儀、CCK-8、DCFH-DA法檢測(cè)

5、USP22及自噬對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、化療藥物抵抗、營(yíng)養(yǎng)缺乏抵抗的影響。
　　結(jié)果:胰腺癌組織USP22及LC3蛋白表達(dá)明顯高于癌旁組織(P=0.000，P=0.011)，胰腺癌組織中USP22與LC3的表達(dá)密切相關(guān)(ρ=0.385，P=0.001)，且USP22與LC3的高表達(dá)導(dǎo)致胰腺癌患者預(yù)后較差(P=0.012，P=0.004)。USP22與胰腺癌的分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、外周侵襲、癌癥分期相關(guān)，而自噬相關(guān)蛋白LC3與分化程度

6、、淋巴轉(zhuǎn)移、癌癥分期相關(guān)(P＜0.05)。
　　Panc-1細(xì)胞USP22過(guò)表達(dá)組自噬相關(guān)蛋白LC3表達(dá)高于對(duì)照組及USP22干擾組，而自噬底物蛋白SQSTM1表達(dá)降低，Beclin1無(wú)明顯變化，且USP22的過(guò)表達(dá)使胰腺癌細(xì)胞中酸性物質(zhì)、溶酶體、自噬小體數(shù)量增多。磷酸化ERK1/2的抑制可使自噬水平下降，而磷酸化AKT的抑制對(duì)自噬水平無(wú)顯著影響。USP22的表達(dá)及自噬水平升高可使胰腺癌細(xì)胞增殖、化療藥物抵抗、營(yíng)養(yǎng)缺乏抵抗能力增加